Een Multi-parametrische Islet Perifusion System binnen een Microfluïdische Perifusion Device
Summary
Een microfluïdische eilandje perifusion apparaat werd ontwikkeld voor de beoordeling van dynamische insuline secretie van verschillende eilandjes en gelijktijdige fluorescentie beeldvorming van calcium influx en mitochondriale potentiële veranderingen.
Abstract
Een microfluïdische eilandje perifusion apparaat werd ontwikkeld voor de beoordeling van dynamische insuline secretie van verschillende eilandjes en gelijktijdige fluorescentie beeldvorming van calcium influx en mitochondriale potentiële veranderingen. Het apparaat bestaat uit drie lagen: eerste laag bevat een array van microschaal putten (500 micrometer diameter en 150 micrometer diepte) die helpen om de eilandjes te immobiliseren, terwijl blootgesteld te stromen en het maximaliseren van het blootgestelde oppervlak van de eilandjes, de tweede laag bevat een cirkelvormige perifusion kamer (3 mm diep, 7 mm diameter), en de derde laag bevat een inlaat-mixing kanaal dat fans voor injectie in de perifusion kamer (2 mm in de breedte, 19 mm in lengte en 500 micrometer lengte) voor het optimaliseren van het mengen efficiency voorafgaand aan het invoeren van de perifusion kamer. De oprichting van verschillende glucose gradiënten waaronder een lineaire, klokvorm, en vierkante vormen kunnen ook worden gecreëerd in de microfluïdische perifusion netwerk en is aangetoond.
Protocol
Discussion
Traditionele eilandje perifusion systemen (macroschaal en microschaal) hebben een aantal beperkingen, met inbegrip complex van opzet en ontwerp, een hoge technische eisen, en de moeite om door de gebruiker voorgeschreven chemische gradiënten te creëren in het systeem. De microfluïdische perifusion systeem hier beschreven overwint deze beperkingen met eenvoudige geometrie van ontwerp en fabricage. Nog belangrijker, kan dit systeem worden geïntegreerd met fluorescentie imaging benadering bepalen dat als een uniek inst…
Acknowledgements
Dit werk werd ondersteund door AAUW internationale gemeenschap om Adeola Adewola, NIH / NCRR (U42RR023245) naar Jose Oberholzer, en The Chicago Diabetes Project.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 60ml Syringes | BD | |||
| Fura-2 fluorescence dye | Molecular Probes Inc. | |||
| Rhodamine123 Fluorescence dye | Molecular Probes Inc. | |||
| Glucose | Sigma | |||
| Bovine Serum Albumin | Sigma | |||
| 30″ Silicone tubings | Cole Palmer | 1/16 x 1/8in | ||
| 1.5ml Eppendorf tubes | Fisher | |||
| Y-connectors | Cole Palmer | 1/16” & 4mm | ||
| Syringe connectors | Cole Palmer | female luer plug 1/16” | ||
| Straight connectors | Cole Palmer | 1/16” | ||
| Elbow connector | Cole Palmer | 1/16” | ||
| Havard syringe pump | Harvard Apparatus | |||
| Perifusion device | ||||
| Hot plate | PMC | |||
| Thermometer | Omega Engineering Inc. | |||
| Fraction collector | Gibson | |||
| Pippettor | Fisher | |||
| Inverted epiflorescence microscope | Olympus | IX71 | ||
| Charge-coupled device | QImaging | Retiga-SRV, Fast 1394 |
Riferimenti
- Mohammed, J. S., Wang, Y., Harvat, T. A., Oberholzer, J., Eddington, D. T. Microfluidic device for multimodal characterization of pancreatic islets. Lab Chip. 9, 97-106 (2009).
