マイクロ流体Perifusionデバイス内のマルチパラメトリック膵島Perifusionシステム
Summary
マイクロ流体膵島perifusionデバイスは、複数の島とカルシウム流入とミトコンドリアの潜在的な変化の同時蛍光イメージングの動的なインスリン分泌の評価のために開発されました。
Abstract
マイクロ流体膵島perifusionデバイスは、複数の島とカルシウム流入とミトコンドリアの潜在的な変化の同時蛍光イメージングの動的なインスリン分泌の評価のために開発されました。装置は3つの層から構成されています：最初の層は、島の露出表面積を流れると、最大化するために露出しながら島を固定するために役立つマイクロウェル（500μmの直径は150μmの深さ）の配列を含み、第二層は円形が含まれていますperifusion室（深さ3 mmの7mmの直径）、および第3層は入口ミキシングチャンネルが含まれており、ファンアウトの前に最適化するためのperifusionチャンバ内へ注入（幅2 mm、長さ19ミリ、高さは500μm）混合効率は、前perifusion室に入る。リニア、ベルの形状を含む様々なグルコースの勾配、および正方形の形状の作成もマイクロ流体perifusionのネットワーク内に作成することができると示されている。
Protocol
Discussion
伝統的な膵島perifusionシステムは、（マクロスケールとマイクロスケール）設定とデザイン、高い技術要件、およびシステム内のユーザ所定の化学的勾配を作成するには難しさの複雑なを含むいくつかの制限があります。ここで説明するマイクロ流体perifusionシステムは、設計と製造のシンプルな形状で、これらの制限を克服しています。さらに重要なことは、このシステムは、膵島生理学を?…
Acknowledgements
この作品は、Adeola Adewola、NIH / NCRR（U42RR023245）ホセオベールホルツァーへ、そしてシカゴの糖尿病のプロジェクトにAAUW国際フェローシップによってサポートされていました。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 60ml Syringes | BD | |||
| Fura-2 fluorescence dye | Molecular Probes Inc. | |||
| Rhodamine123 Fluorescence dye | Molecular Probes Inc. | |||
| Glucose | Sigma | |||
| Bovine Serum Albumin | Sigma | |||
| 30″ Silicone tubings | Cole Palmer | 1/16 x 1/8in | ||
| 1.5ml Eppendorf tubes | Fisher | |||
| Y-connectors | Cole Palmer | 1/16” & 4mm | ||
| Syringe connectors | Cole Palmer | female luer plug 1/16” | ||
| Straight connectors | Cole Palmer | 1/16” | ||
| Elbow connector | Cole Palmer | 1/16” | ||
| Havard syringe pump | Harvard Apparatus | |||
| Perifusion device | ||||
| Hot plate | PMC | |||
| Thermometer | Omega Engineering Inc. | |||
| Fraction collector | Gibson | |||
| Pippettor | Fisher | |||
| Inverted epiflorescence microscope | Olympus | IX71 | ||
| Charge-coupled device | QImaging | Retiga-SRV, Fast 1394 |
Riferimenti
- Mohammed, J. S., Wang, Y., Harvat, T. A., Oberholzer, J., Eddington, D. T. Microfluidic device for multimodal characterization of pancreatic islets. Lab Chip. 9, 97-106 (2009).
