Ein Multi-Parametric Islet Perifusion System innerhalb eines mikrofluidischen Perifusion Geräte
Summary
Ein mikrofluidischen Insel perifusion Gerät wurde für die Beurteilung der Dynamik der Insulinsekretion von mehreren Inselchen und gleichzeitige Fluoreszenz-Imaging von Calcium-Einstrom und die mitochondriale möglichen Veränderungen entwickelt.
Abstract
Ein mikrofluidischen Insel perifusion Gerät wurde für die Beurteilung der Dynamik der Insulinsekretion von mehreren Inselchen und gleichzeitige Fluoreszenz-Imaging von Calcium-Einstrom und die mitochondriale möglichen Veränderungen entwickelt. Das Gerät besteht aus drei Schichten: erste Schicht enthält eine Reihe von mikro-Brunnen (500 Mikrometer Durchmesser und 150 um Tiefe), die zu den Inseln zu immobilisieren, während ausgesetzt zu fließen und maximieren die exponierte Fläche der Inseln zu helfen, die zweite Schicht enthält eine kreisförmige perifusion Kammer (3 mm tief, 7 mm Durchmesser), und die dritte Schicht enthält einen Einlass-Mischkanal, dass die Fans vor der Injektion in die perifusion Kammer (2 mm in der Breite, 19 mm in der Länge und 500 pm in der Höhe) zur Optimierung der die Mischwirkung vor dem Eintritt in die perifusion Kammer. Die Schaffung verschiedener Glukose Gradienten mit einem linear, Glockenform, und quadratischen Formen können auch in der mikrofluidischen perifusion Netzwerk geschaffen werden, und demonstriert.
Protocol
Discussion
Traditionelle Insel perifusion Systeme (makroskopischen und mikro-) einige Einschränkungen, einschließlich komplexer der Einrichtung und Design, hohe technische Anforderungen und Schwierigkeiten, benutzerdefinierte vorgeschriebenen chemischen Gradienten in das System zu erstellen. Die mikrofluidischen perifusion hier beschriebene System überwindet diese Einschränkungen mit einfachen Geometrie der Konstruktion und Fertigung. Noch wichtiger ist, kann dieses System mit Fluoreszenz-Imaging-Ansatz, die als ein einzigarti…
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde von AAUW internationalen Gemeinschaft zu Adeola Adewola, NIH / NCRR (U42RR023245) zu Jose Oberholzer, und die Chicago Diabetes-Projekt unterstützt.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 60ml Syringes | BD | |||
| Fura-2 fluorescence dye | Molecular Probes Inc. | |||
| Rhodamine123 Fluorescence dye | Molecular Probes Inc. | |||
| Glucose | Sigma | |||
| Bovine Serum Albumin | Sigma | |||
| 30″ Silicone tubings | Cole Palmer | 1/16 x 1/8in | ||
| 1.5ml Eppendorf tubes | Fisher | |||
| Y-connectors | Cole Palmer | 1/16” & 4mm | ||
| Syringe connectors | Cole Palmer | female luer plug 1/16” | ||
| Straight connectors | Cole Palmer | 1/16” | ||
| Elbow connector | Cole Palmer | 1/16” | ||
| Havard syringe pump | Harvard Apparatus | |||
| Perifusion device | ||||
| Hot plate | PMC | |||
| Thermometer | Omega Engineering Inc. | |||
| Fraction collector | Gibson | |||
| Pippettor | Fisher | |||
| Inverted epiflorescence microscope | Olympus | IX71 | ||
| Charge-coupled device | QImaging | Retiga-SRV, Fast 1394 |
Riferimenti
- Mohammed, J. S., Wang, Y., Harvat, T. A., Oberholzer, J., Eddington, D. T. Microfluidic device for multimodal characterization of pancreatic islets. Lab Chip. 9, 97-106 (2009).
