Obtenção Hemócitos do Hawaiian Bobtail Squid Euprymna scolopes Observando e sua adesão a bactérias simbióticas e não-simbióticas
Summary
Este vídeo vai demonstrar como obter hemócitos (células sangüíneas) a partir do Hawaiian bobtail lula,<em> Euprymna scolopes</em> Para utilização em ensaios biológicos de células bacterianas e aderência. Hemócitos serão marcadas com um corante fluorescente e expostos a GFP-rotulados bactérias.
Abstract
Estudos sobre o papel do sistema imunológico na mediação de sinalização molecular entre bactérias benéficas e os seus anfitriões têm, nos últimos anos, fez contribuições significativas para a nossa compreensão da co-evolução dos eucariotos com sua microbiota. A associação simbiótica entre o havaiano bobtail lula,<em> Euprymna scolopes</em> E bactéria bioluminescente<em> Vibrio fischeri</em> Tem sido utilizado como um sistema modelo para entender os efeitos das bactérias benéficas no desenvolvimento animal. Estudos recentes têm demonstrado que macrófagos-like hemócitos, o único componente celular do sistema inato do hospedeiro lula imune, provavelmente desempenham um papel importante na mediação do estabelecimento e manutenção da associação. Este protocolo irá demonstrar como obter hemócitos de<em> E. scolopes</em> E depois usar essas células em ensaios de ligação bacteriana. Adulto lula são os primeiros anestesiados antes de hemolinfa coletadas pela seringa do vaso sanguíneo principal cefálica. Os hemócitos host, contidas na hemolinfa extraídos, são aderidas em lamínulas de vidro câmaras e expostos à proteína fluorescente verde marcado simbiótica<em> Vibrio fischeri</em> E não-simbiótica<em> Vibrio harveyi</em>. Os hemócitos são contrastado com um corante fluorescente (Cell Rastreador de Orange, Invitrogen) e, em seguida, visualizado por microscopia de fluorescência.
Protocol
Discussion
Estudos sobre o papel do sistema imunológico na mediação de sinalização molecular entre bactérias benéficas e os seus anfitriões têm, nos últimos anos, fez contribuições significativas para a nossa compreensão da co-evolução dos eucariotos com sua microbiota. O sistema squid / vibrio provou-se como um sistema modelo tratável para responder a perguntas fundamentais neste campo 2,3,5,6,8. A luz de órgãos do Euprymna squid scolopes permite a colonização exclusivamente pela b…
Acknowledgements
Fontes de financiamento: Universidade de Connecticut Research Foundation e do Departamento de Biologia Molecular e Celular para SVN, Sigma Xi Grant-in-Aid de Pesquisa e H. e R. Antonio Majorie
Romano de Pós-Graduação Educação Fellowship para AJC
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Lab-Tek chambered #1.0 borosilicate coverglass system (8-chambers) | Thermo-Fisher Scientific | 155411 | ||
| 26.5 G 1ml latex-free insulin syringe | Becton, Dickinson and Company | C34551 | ||
| Cell Tracker Orange | Invitrogen | C34551 | ||
| SteREO Discovery V20 Microscope | Zeiss | |||
| SP2 Confocal Microscope | Leica |
Riferimenti
- Koropatnick, T. A., Kimbell, J. R., McFall-Ngai, M. J. Responses of host hemocytes during the initiation of the squid-Vibrio symbiosis. Biol. Bull. 212, 29-39 (2007).
- McFall-Ngai, M. J. Unseen forces: the influence of bacteria on animal development. Dev. Biol. 242, 1-14 (2002).
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- Nyholm, S. V., Stewart, J. J., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. Recognition between symbiotic Vibrio fischeri and the haemocytes of Euprymna scolopes. Environ. Microbiol. 11, 483-493 (2009).
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- Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. Sampling the light-organ microenvironment of Euprymna scolopes: description of a population of host cells in association with the bacterial symbiont Vibrio fischeri. Biol Bull. 195, 89-97 (1998).
- Visick, K. L., Ruby, E. G. Vibrio fischeri and its host: it takes two to tango. Curr. Opin. Microbiol. 9, 632-638 (2006).
