检索小鼠卵母细胞
Summary
该协议说明了从小鼠的输卵管中提取卵母细胞或早期胚胎受精技术。能够识别infindibulum和钝年底针插入正确执行的程序是必不可少的。
Abstract
迄今为止，只有少数的研究报告Peromyscus胚胎发育或生殖生物学的成功操作。连同Peromyscus遗传联合中心（http://stkctr.biol.sc.edu），我们需要制定本系统的显着差异特征。一个主要目标，以优化的卵母细胞/早期胚胎的检索。
Protocol
胚胎/取卵必须从-20 °解冻胚胎/卵母细胞的检索至少两个小时前，KSOM放置在37 ° C 共 2孵化器和FHM的。一个玻璃盘，其中包含三个凹浅水井是用来房子KSOM滴在孵化器。为了防止脱水，KSOM和菜都放置在有盖的容器，在底部的水。该仪器可以防止不使用矿物油的蒸发。 从排卵期女性输卵管被放置在FHM媒体。要确保的方向和一个完整的infindibulum，一个卵巢的一小部分被切…
Discussion
在这篇文章中，我们展示了从排卵诱导（超排）Peromyscus的卵母细胞的检索。利用超数排卵（相对于自然发情周期）是常见的，由于导致数字更大。然而，必须采取谨慎解释结果，利用这样的卵母细胞/胚胎，激素用于诱导排卵和培养可能有特效。
当发情已证实，女性euthenized和输卵管与卵巢的一小部分一起回收。卵巢小区域被用作infindibulum的位置的标记。 infindibulum坐在旁边卵巢，经常通过组织一层薄薄的预?…
Acknowledgements
我想感谢他的帮助，耐心和知识迈克杜威Peromyscus遗传库存中心。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Flushing needle | Tool | Zephyrtronics | ZT5-130-L | 30 gauge blunt |
| Forceps (2) | Tool | Roboz | RS-5060 | |
| Peromyscus | Animal | Peromyscus Genetic Stock Center | ||
| Scissors | Tool | Roboz | RS-5880 | |
| FHM HEPES Buffered Media | Reagent | Specialty Media | MR-025-d | |
| KSOM Embryo Culture Medium (5×10 ml) | Reagent | Specialty Media | MR-020P-5F | |
| Mouth Pipette | Tool | Pulled from glass capillaries and attached to rubber tubing | ||
| Oocyte holding dish | Tool | Glass container with concave divets |
Citazione di questo articolo
Duselis, A. R., Vrana, P. B. Retrieval of Mouse Oocytes. J. Vis. Exp. (3), e185, doi:10.3791/185 (2007).