마우스 Oocytes의 검색

Summary

이 프로토콜은 생쥐의 수란관에서 추출 oocytes 또는 초기 단계 수정된 배아에 대한 기법을 보여줍니다. infindibulum를 식별하고 그것에 뭉툭한 끝을 바늘을 삽입하는 기능은 제대로 절차를 수행하는 것이 필수적입니다.

Abstract

지금까지 단 몇 연구 Peromyscus embryogenesis 또는 생식 생물학의 성공적인 조작을보고있다. 함께 Peromyscus 유전 증권 센터 (http://stkctr.biol.sc.edu)로, 우리는이 시스템을 개발하는 데 필요한 돌출 차이를 특성화하고 있습니다. 기본 목표는 oocyte / 초기 배아 검색을 최적화되었습니다.

Protocol

배아 / Oocyte 검색 이전 배아 / oocytes의 검색에 적어도 두 시간은, KSOM가 37 º C CO 2 배양기와 FHM에 배치됩니다는 -20 °에서 해동의해야합니다. 세 오목한 얕은 우물을 포함하는 유리 그릇은 인큐베이터에 KSOM의 집 방울하는 데 사용됩니다. 탈수 방지하기 위해, KSOM와 접시는 바닥에 물이있는 lidded 컨테이너에 배치됩니다. 이 장치는 광유를 사용하지 않고 증발을 방지합니다. <…

Discussion

이 문서에서는, 우리는 배란 유도 (superovulated) Peromyscus에서 oocytes의 검색을 보여줍니다. superovulation의 사용은 (천연 estrous 사이클 반대) 때문에 훨씬 더 결과 숫자로 일반적입니다. 그러나,주의는 배란과 culturing를 유도하는 데 사용되는 호르몬이 모두 영향을 수 있으므로, 이러한 oocytes / 배아를 이용 결과를 해석에 촬영해야합니다.

estrous이 확정되면, 암컷은 euthenized와 oviducts는 난소의 일부와 함께 회복되었?…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Flushing needle	Tool	Zephyrtronics	ZT5-130-L	30 gauge blunt
Forceps (2)	Tool	Roboz	RS-5060
Peromyscus	Animal	Peromyscus Genetic Stock Center
Scissors	Tool	Roboz	RS-5880
FHM HEPES Buffered Media	Reagent	Specialty Media	MR-025-d
KSOM Embryo Culture Medium (5×10 ml)	Reagent	Specialty Media	MR-020P-5F
Mouth Pipette	Tool			Pulled from glass capillaries and attached to rubber tubing
Oocyte holding dish	Tool			Glass container with concave divets