Hämtning av Mouse oocyter
Summary
Detta protokoll illustrerar tekniken för utvinning av ägg eller tidiga befruktade embryon från äggledare hos möss. Förmågan att identifiera infindibulum och sätt in en trubbiga änden nål i är det viktigt att korrekt hela proceduren.
Abstract
Hittills har endast ett fåtal studier som rapporterat framgångsrika manipulationer Peromyscus embryogenesen eller reproduktiva biologi. Tillsammans med Peromyscus Genetiska Stock Center (http://stkctr.biol.sc.edu), vi är som kännetecknar de framträdande skillnader behövs för att utveckla detta system. Ett primärt mål har varit att optimera äggcellen / tidiga embryot hämtning.
Protocol
Discussion
I denna artikel visar vi att hämta ägg från ägglossning-inducerad (superovulated) Peromyscus. Användningen av superovulation (i motsats till naturliga estrous cykel) är vanlig på grund av den mycket större resulterande numren. Dock måste försiktighet iakttas vid tolkningen av resultaten använda sådana oocyter / embryon, eftersom både de hormoner som används för att framkalla ägglossning och odling kan ha effekter.
När estrous har bekräftats, är kvinnor euthenized och äggledarna återhämtade tillsammans med en li…
Acknowledgements
Jag vill tacka Mike Dewey från Peromyscus genetiska Stock Centrum för hans hjälp, tålamod och kunskap.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Flushing needle | Tool | Zephyrtronics | ZT5-130-L | 30 gauge blunt |
| Forceps (2) | Tool | Roboz | RS-5060 | |
| Peromyscus | Animal | Peromyscus Genetic Stock Center | ||
| Scissors | Tool | Roboz | RS-5880 | |
| FHM HEPES Buffered Media | Reagent | Specialty Media | MR-025-d | |
| KSOM Embryo Culture Medium (5×10 ml) | Reagent | Specialty Media | MR-020P-5F | |
| Mouth Pipette | Tool | Pulled from glass capillaries and attached to rubber tubing | ||
| Oocyte holding dish | Tool | Glass container with concave divets |
