В этой статье показано вскрытие и инкубации сетчатки кролика и частица-опосредованного переноса генов плазмид кодирования GFP или различных субклеточных маркеров в ганглиозных клеток сетчатки.
Abstract
Органотипической системы культуры функциональных нервных тканей являются важными инструментами в нейробиологических исследований. В идеале такая система должна быть совместима с методов визуализации, генетические манипуляции, и электрофизиологические записи. Здесь мы приведем простой межфазной культуры тканей система для взрослых сетчатки кролика, что не требует никакого специального оборудования и минимального обслуживания. Мы показываем, рассечение и инкубации сетчатки кролика и частица-опосредованного переноса генов плазмид кодирования GFP или различных субклеточных маркеров в ганглиозных клеток сетчатки. Кролик сетчатки культурный таким образом, может быть поддержана в течение 6 дней с очень небольшим изменением общей структуре анатомических или морфологии отдельных ганглиев и amacrine клеток.
Protocol
Создание генной пушки пулями (GOLD) Сделать 100X ПВП (0.5mg/ml) в 100% этанола. Взвесьте из 30 мг BioRad 1,6 золота Micron микроносителей и поместить его в трубку 1,5 мл Eppendorf. Рассчитать количество плазмиды, необходимых для получения концентрации 0,5-3 мкг плазмиды / мг золота, и место плазмиды ?…
Discussion
1. Что я могу сделать с помощью этого метода?
Смотрите морфологии клеток ясно.
Этикетка клетки для записи на них.
Гиперэкспрессией белка, как и PSD95, но и других белков, которые модулируют ответ клетки, например, ионные каналы, рецепторы.
Экспресс тормозных РНК.
2. Как долг…
Riferimenti
Landreth, . B. W., Agranoff, N. R., Smalheiser, S. M., Crain, M. B., Bornstein, R., Adler, P. J., Magistretti, A. G., Hyndman, W. J., Shoemaker, H., Rehm, T., Schafer, H., Betz, S. U., Kim, H., Takahashi, A. R., Caffe, A., Soderpalm, T., van Veen, H. C., Wong, S., Thompson, D. Y., Yu, S. J., Cringle, V. A., Alder, S. J., Taylor, G. M., Seigel, A. R., Caffe, P., Ahuja, B., Holmqvist, S., Azadi, J., Forsell, I., Holmqvist, J., Hatakeyama, R., Kageyama, S. S., Zhang, X. Y., Fu, C. J., Barnstable, S. W., Wang, X., Mu, W. J., Bowers, W. H., Klein, T., Inoue, M., Hojo, Y., Bessho, Y., Tano, J., Lee, R., Kageyama, A., Kretz, S. H., Hermening , S., Isenmann , I., Liljekvist-Larsson, K., Johansson, B., Reidel, W., Orisme, T., Goldmann, W. C., Smith, U., Wolfrum, H., Xin, J. A., Yannazzo, R. S., Duncan, E. V., Gregg, M., Singh, P., Koulen, S. A., Johnston, D. C., Tang, D. C., Lo, A. K., McAllister, K. a. t. z., LC, L. E., Rajagopalan, J. S., Malter, A. K., McAllister, W. -. B., Gan, J., Grutzendler, W., Wong, R., Wong, J., Lichtman, H., Sato, S., Hattori, S., Kawamoto, I., Kudoh, A., Hayashi, I., Yamamoto, G., Zhang, M. E., Selzer, R. L., Sohn, M. T., Murray, K., Schwarz, J., Nyitray, P., Purray, A. P., Franko, J. A., O’Brien, M., Holt, G., Whiteside, S. C., Lummis, M. H., Hastings, L., Klimaschewski, W., Nindl, M., Pimpl, P., Waltinger, K., Pfaller, P., Kettunen, J., Demas, C., Lohmann, N., Kasthuri, Y., Gong, R. O., Wong, N., Gamper, M. S., Shapiro, M. J., Wirth, P., Wahle, J., O’Brien, S. C., Lummis, A. M., Benediktsson, S. J., Schachtele, S. H., Green, M. E., Dailey, L., Chow, E. M., Levine, T. A., Reh, R. L., Rockhill, F. J., Daly, M. A., MacNeil, S. P., Brown, R. H., Masland, W., Sun, N., Li, S., He, W., Sun, N., Li, S., He, R. C., Stacy, R. O., Wong, E., Strettoi, V., Pignatelli, C., Rossi, V., Porciatti, B., Falsini, V., Pignatelli, E., Strettoi, V. P., Connaughton, D., Graham, R., Nelson, P. H., Edqvist, F., Hallbook, T. C., Jakobs, R. T., Libby, Y., Ben, S. W., John, R. H., Masland, Y., Qin, G., Xu, W., Wang, R., Roizenblatt, J. D., Weiland, S., Carcieri, G., Qiu, M., Behrend, M. S., Humayun, A., Koizumi, G., Zeck, Y., Ben, R. H., Masland, T. C., Jakobs, Explant culture of adult goldfish retina: a model for the study of CNS regeneration.Brain Res. 161, 39-55 (1979).