Summary

Органотипической культуры взрослых сетчатки кролика

Published: April 29, 2007
doi:

Summary

В этой статье показано вскрытие и инкубации сетчатки кролика и частица-опосредованного переноса генов плазмид кодирования GFP или различных субклеточных маркеров в ганглиозных клеток сетчатки.

Abstract

Органотипической системы культуры функциональных нервных тканей являются важными инструментами в нейробиологических исследований. В идеале такая система должна быть совместима с методов визуализации, генетические манипуляции, и электрофизиологические записи. Здесь мы приведем простой межфазной культуры тканей система для взрослых сетчатки кролика, что не требует никакого специального оборудования и минимального обслуживания. Мы показываем, рассечение и инкубации сетчатки кролика и частица-опосредованного переноса генов плазмид кодирования GFP или различных субклеточных маркеров в ганглиозных клеток сетчатки. Кролик сетчатки культурный таким образом, может быть поддержана в течение 6 дней с очень небольшим изменением общей структуре анатомических или морфологии отдельных ганглиев и amacrine клеток.

Protocol

Создание генной пушки пулями (GOLD) Сделать 100X ПВП (0.5mg/ml) в 100% этанола. Взвесьте из 30 мг BioRad 1,6 золота Micron микроносителей и поместить его в трубку 1,5 мл Eppendorf. Рассчитать количество плазмиды, необходимых для получения концентрации 0,5-3 мкг плазмиды / мг золота, и место плазмиды ?…

Discussion

1. Что я могу сделать с помощью этого метода?

  • Смотрите морфологии клеток ясно.
  • Этикетка клетки для записи на них.
  • Гиперэкспрессией белка, как и PSD95, но и других белков, которые модулируют ответ клетки, например, ионные каналы, рецепторы.
  • Экспресс тормозных РНК.

2. Как долг…

Riferimenti

  1. Landreth, . B. W., Agranoff, N. R., Smalheiser, S. M., Crain, M. B., Bornstein, R., Adler, P. J., Magistretti, A. G., Hyndman, W. J., Shoemaker, H., Rehm, T., Schafer, H., Betz, S. U., Kim, H., Takahashi, A. R., Caffe, A., Soderpalm, T., van Veen, H. C., Wong, S., Thompson, D. Y., Yu, S. J., Cringle, V. A., Alder, S. J., Taylor, G. M., Seigel, A. R., Caffe, P., Ahuja, B., Holmqvist, S., Azadi, J., Forsell, I., Holmqvist, J., Hatakeyama, R., Kageyama, S. S., Zhang, X. Y., Fu, C. J., Barnstable, S. W., Wang, X., Mu, W. J., Bowers, W. H., Klein, T., Inoue, M., Hojo, Y., Bessho, Y., Tano, J., Lee, R., Kageyama, A., Kretz, S. H., Hermening , S., Isenmann , I., Liljekvist-Larsson, K., Johansson, B., Reidel, W., Orisme, T., Goldmann, W. C., Smith, U., Wolfrum, H., Xin, J. A., Yannazzo, R. S., Duncan, E. V., Gregg, M., Singh, P., Koulen, S. A., Johnston, D. C., Tang, D. C., Lo, A. K., McAllister, K. a. t. z., LC, L. E., Rajagopalan, J. S., Malter, A. K., McAllister, W. -. B., Gan, J., Grutzendler, W., Wong, R., Wong, J., Lichtman, H., Sato, S., Hattori, S., Kawamoto, I., Kudoh, A., Hayashi, I., Yamamoto, G., Zhang, M. E., Selzer, R. L., Sohn, M. T., Murray, K., Schwarz, J., Nyitray, P., Purray, A. P., Franko, J. A., O’Brien, M., Holt, G., Whiteside, S. C., Lummis, M. H., Hastings, L., Klimaschewski, W., Nindl, M., Pimpl, P., Waltinger, K., Pfaller, P., Kettunen, J., Demas, C., Lohmann, N., Kasthuri, Y., Gong, R. O., Wong, N., Gamper, M. S., Shapiro, M. J., Wirth, P., Wahle, J., O’Brien, S. C., Lummis, A. M., Benediktsson, S. J., Schachtele, S. H., Green, M. E., Dailey, L., Chow, E. M., Levine, T. A., Reh, R. L., Rockhill, F. J., Daly, M. A., MacNeil, S. P., Brown, R. H., Masland, W., Sun, N., Li, S., He, W., Sun, N., Li, S., He, R. C., Stacy, R. O., Wong, E., Strettoi, V., Pignatelli, C., Rossi, V., Porciatti, B., Falsini, V., Pignatelli, E., Strettoi, V. P., Connaughton, D., Graham, R., Nelson, P. H., Edqvist, F., Hallbook, T. C., Jakobs, R. T., Libby, Y., Ben, S. W., John, R. H., Masland, Y., Qin, G., Xu, W., Wang, R., Roizenblatt, J. D., Weiland, S., Carcieri, G., Qiu, M., Behrend, M. S., Humayun, A., Koizumi, G., Zeck, Y., Ben, R. H., Masland, T. C., Jakobs, Explant culture of adult goldfish retina: a model for the study of CNS regeneration. Brain Res. 161, 39-55 (1979).
check_url/it/190?article_type=t&slug=organotypic-culture-of-adult-rabbit-retina

Play Video

Citazione di questo articolo
Lye, M. H., Jakobs, T. C., Masland, R. H., Koizumi, A. Organotypic Culture of Adult Rabbit Retina. J. Vis. Exp. (3), e190, doi:10.3791/190 (2007).

View Video