Células vivas, imágenes y análisis cuantitativo de las células epiteliales embrionarias en Xenopus laevis</em

Summary

Xenopus epitelios embrionarios son un sistema modelo ideal para estudiar los comportamientos celulares, tales como el desarrollo de la polaridad y cambiar de forma durante la morfogénesis epitelial. Histología tradicional de muestras fijas cada vez se complementa con células vivas de imagen confocal. Aquí se demuestra métodos para aislar los tejidos de rana y visualizar en directo las células epiteliales y su citoesqueleto utilizando células vivas, la microscopía confocal.

Abstract

Embrionario las células epiteliales servir como un modelo ideal para estudiar la morfogénesis, donde multicelulares tejidos experimentan cambios en su geometría, tales como cambios en el área de la superficie celular y la altura de la celda, y donde las células sufren mitosis y la migración. Además, las células epiteliales también pueden regular los movimientos morfogenéticos en los tejidos adyacentes¹. Un método tradicional para estudiar las células epiteliales y los tejidos implican la fijación química y métodos histológicos para determinar la morfología de las células o la localización de las proteínas de interés. Estos enfoques siguen siendo útiles y proporcionar "instantáneas" de las formas celulares y la arquitectura del tejido, sin embargo, aún queda mucho por comprender acerca de cómo las células adquieren formas específicas, como diversas proteínas se mueven o localizar a los puestos específicos, y lo que las células caminos seguir hacia su destino final destino diferenciado. De alta resolución de imágenes en directo complementa los métodos tradicionales y también permite una investigación más directa en los procesos celulares implicados en la dinámica, la formación, mantenimiento y morfogénesis de las hojas epiteliales multicelulares. Aquí nos demuestran los métodos experimentales de la tapa de aislamiento de los tejidos de los animales de<em> Xenopus laevis</em> Embriones de imagen confocal de células epiteliales y métodos sencillos de medición que en conjunto pueden aumentar los estudios moleculares y celulares de la morfogénesis epitelial.

Protocol

Antes de comenzar Sintetizar ARNm tope de la plantilla de ADN que codifica la proteína lineal marcado con fluorescencia y el ARNm de purificar por métodos estándar (kit AmpliCap transcripción; Biotecnologías Epicentro, Madison WI). ARNm debe ser alícuotas para el uso del tiempo solo en tubos de 0,2 ml de centrífuga y se almacenan a -80 ° C. Métodos estándar para obtener los huevos, la fecundación in vitro y la eliminación de la capa de huevo se han descri…

Discussion

Hemos presentado los protocolos experimentales utilizados regularmente en nuestro laboratorio para la imagen del citoesqueleto cambian dinámicamente en la corteza celular apical y oscilantes las membranas celulares de las células epiteliales en los embriones de Xenopus. Se debe utilizar estos protocolos como punto de partida para la creación de imágenes en vivo de las formas de las células epiteliales, la optimización de este protocolo es esencial, y algunos de los valores cambian en función del tipo de …