라이브 셀 이미징 및 배아 상피 세포의 정량 분석 Xenopus laevis</em
Summary
Xenopus 배아 상피 조직은 상피 morphogenesis 동안 극성 개발 및 형태의 변화와 같은 세포 행위를 연구하는 이상적인 모델 시스템입니다. 고정 샘플 전통 조직학 점점 라이브 셀 이미징 공촛점에 의해 보완되고있다. 여기 개구리 조직을 분리 및 라이브 세포 공촛점 현미경을 사용하여 라이브 상피 세포 및 cytoskeleton을 시각화하는 방법을 보여줍니다.
Abstract
배아 상피 세포가 여러 세포 조직은 이러한 세포 표면적과 셀 높이의 변화로 자신의 형상의 변화를 받아야 어디 morphogenesis을 연구하는 이상적인 모델 역할을하고, 세포가 유사 분열을 받아야하고 마이 그 레이션하는 곳. 또한 상피 세포는 인접한 조직에 morphogenetic 움직임을 통제할 수<sup> 1</sup>. 상피 세포와 조직을 연구하는 전통적인 방법은 화학 고정 및 세포 형태이나 관심의 특정 단백질의 지방화를 결정하는 histological 방법을 포함하고 있습니다. 이러한 방식은 유용하고 세포 형태와 조직 구조의 "스냅샷"을 제공하기 위해 계속하지만, 많은 여러 가지 단백질이 이동하거나 특정 위치로 집중하는 방법 세포가 특정 모양을 습득하고, 어떤 경로로 세포들이 최종 향해 수행하는 방법에 대한 이해에 남아 차별 운명. 고해상도 라이브 영상 전통적인 방법을 보완하고 또한 다세포 상피 시트의 형성, 유지 보수 및 morphogenesis 관련 동적 세포 프로세스에 더 직접적인 조사가 있습니다. 여기에서 동물 캡 조직의 고립에서 실험 방법을 보여줍니다<em> Xenopus laevis</em> 함께 상피 morphogenesis의 분자 및 세포 연구를 확대 할 수 상피 세포와 간단한 측정 방법의 공촛점 이미징에 배아.
Protocol
Discussion
우리는 혀끝의 세포 피질 및 Xenopus의 배아에서 상피 세포의 세포 세포막을 진동의 이미지를 동적으로 변화하는 cytoskeleton에 우리가 실험실에서 정기적으로 사용되는 실험 프로토콜을 제시했습니다. 이 프로토콜의 최적화 필수적이며, 설정 중 일부는 현미경 시스템을 하나의 유형에 따라 변경됩니다 있으며 단백질 하나의 타입은 이미지에 관심이있다, 하나는 상피 세포 모양의 라이브 영상…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 국립 보건 연구소 (R01 – HD044750), 국립 과학 재단 (National Science Foundation)에서 경력 부여, 그리고 미국 심장 협회 (보조금을 시작)의 지원에 의해 지원되었다. 분자 생물학과 합성 mRNA 그녀의 도움 HY 김, M. 폰 Dassow 및 J. 만주국 (매일 연구실 책임에 대한 도움), 그리고 린 장 : 저자 데이비슨 연구소 회원 주셔서 감사합니다. 우리는 지난 몇 년 동안 다양한 방법을 개발하고 테스트하여,이 프로토콜의 일부에 기여한 모든 개구리 실험실 (특히 레이 켈러의 더그 DeSimone의)에서 실험적인 노력을 인정합니다. 우리는 각각 멤 – GFP 및 moesin – GFP의 plasmids 그들의 종류의 선물 리차드 할랜드와 존 월링포드 감사드립니다.
Riferimenti
- Ninomiya, H., Winklbauer, R. Epithelial coating controls mesenchymal shape change through tissue-positioning effects and reduction of surface-minimizing tension. Nat Cell Biol. 10 (1), 61-61 (2008).
- Kay, B. K., Peng, H. B. . Xenopus laevis: Practical Uses in Cell and Molecular Biology. , (1991).
- Cross, M. K., Powers, M. Obtaining eggs from Xenopus laevis females. J Vis Exp. , (2008).
- Cohen, S., Au, S., Pante, N. Microinjection of Xenopus laevis oocytes. J Vis Exp. , (2009).
- Nieuwkoop, P. D., Faber, J. . Normal Tables of Xenopus laevis (Daudin). , (1967).
- Davidson, L. A., Ezin, A. M., Keller, R. Embryonic wound healing by apical contraction and ingression in Xenopus laevis. Cell Motil Cytoskeleton. 53 (3), 163-163 (2002).
- Joshi, S. D., Dassow, M. v. o. n., Davidson, L. A. Experimental control of excitable embryonic tissues: three stimuli induce rapid epithelial contraction. Exp Cell Res. 316 (1), 103-103 (2010).
