의 준비 Drosophila S2 세포
Summary
Drosophila 슈나이더 (S2) 세포가 유전자의 발견과 기능 분석을위한 점점 인기있는 시스템입니다. 우리의 목표는 점점 더 중요한 실험 시스템 S2 세포를 만드는 미세한 기법 중 일부를 설명하는 것입니다.
Abstract
이상적인 실험 시스템은 기술의 다양한 의무 유지하기 위해 저렴하고 쉽게 될, 그리고 광범위한 문학 게놈 시퀀스 데이터베이스에 의해 지원됩니다. 교양 Drosophila S2 세포, 정신을 20-24시간 오래된 태아 1의 제품은 이러한 모든 속성을 보유하고 있습니다. 따라서, S2 세포는 매우 분자 과정의 구성 요소 또는 관심 메커니즘을 인코딩 유전자의 발견을 포함하여 세포 프로세스의 분석에 적합합니다. 그들의 유틸리티에 대한 대부분의 책임이 S2 세포의 기능은 라이브 또는 고정 형식으로 그들이 유지하고있는 용이성을 두 번 좌초 (DS) RNA – 중재 간섭 (RNAi)들의 아름다운 감성과 형광 현미경 자신 tractability 아르 세포.
S2 세포는 저렴한, 상용 – 가능, 완벽한 정의, 혈청 프리 미디어 2의 숫자를 포함하여, 다양한 미디어로 성장하실 수 있습니다. 또한, 그들은 21-24 ° C에서 최적으로 빠르게 성장하고 컨테이너의 다양한 교양 수 있습니다. 포유 동물 세포와는 달리, S2 전지는 규제 분위기를 필요로하지 않지만, 대신에 일반 공기와 잘 심지어 밀폐 flasks 유지하실 수 있습니다.
S2 세포에서 RNAi의 용이성을 보완하는 것은 쉽게 위상 또는 고정 또는 라이브 세포의 형광 현미경에 의해 실험적으로 유도된 phenotypes을 분석하는 능력입니다. S2 세포는 단일 monolayer로 문화의 성장하지만, 연락처 억제를 표시하지 않습니다. 대신, 세포는 짙은 문화의 식민지에서 성장하는 경향이있다. 저밀도에서 S2 문화 원형과 느슨하게 연결된 아르 유리 또는 조직 문화 처리 플라스틱에서 성장. 그러나, S2 세포의 세포학은 크게 렉틴, concanavalin A (코나) 3 코팅 표면에 간단히 culturing 그들에 의해 광범위하게 버리고 그들을 유도하여 향상시킬 수 있습니다. S2 세포도 안정 레이블 구조 또는 거주 또는 고정 세포에 대한 관심의 organelles에 찬란 – 태그 마커와 transfected 수 있습니다. 따라서, 세포의 미세한 분석을위한 일반적인 시나리오는 이것입니다 : 우선, S2 전지 (태그 마커를 표현하는 transgenes을 가지고 수) 대상 단백질 (들)를 제거하는 RNAi에 의해 처리됩니다. RNAi 치료 시간은 단백질의 차이 수 있도록 조정할 수 있습니다 대상 단백질은 생존에 중요한 경우 속도론을 넘겨주 및 세포 외상 / 죽음을 최소화하기 위해. 다음 치료 세포가 확산 세포를 유도하고 단단히 유리에 준수하는 코나 사전 코팅 coverslip을 포함하는 음식으로 전송됩니다. 마지막으로, 세포는 현미경 모드의 연구자의 선택과 몇 군데 있습니다. 이러한 세포가 실내 온도와 정상적인 분위기에서 건강을 유지 이후 S2 세포 사는 세포의 확장 시각화를 필요로하는 연구에 특히 좋다.
Protocol
Discussion
세포 생물학 분야의 경우, 이상적인 시스템은 조작하기 쉬운 유지하기 위해 저렴한 것이고, 기술의 다양한 의무. Drosophila S2 세포는 이러한 요구 사항을 만족하고, 그래서 그들은 빠르게 세포의 증가에 대한 선택의 시스템이되었습니다 생물학 실험실.
우리는 현미경에 대한 S2 세포를 준비하는 방법에 대한 간략한 개요를 제시했습니다. S2 세포의 주목할만한 미덕들은 ?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 국립 암 연구소 P30 CA23074, 미국 암 학회 연구 기관 그랜트 74-001-31, 그리고 대학에 의해 부분적으로 지원되었다. 애리조나 GI 스포어 (NCI / NIH CA9506O)의.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| S2 cells | ATCC | CRL-1963 | http://www.atcc.org/ | |
| S2 cells | DGRC | stock number 6 | https://dgrc.cgb.indiana.edu/ | |
| S2 cells | Invitrogen | R690-07 | ||
| Sf900 II | Invitrogen | 10902-096 | serum-free medium | |
| HyClone SFX-Insect | Thermo Scientific | SH30278 | serum-free medium | |
| Insect-Xpress | BioWhittaker | 12-730 | serum-free medium | |
| Schneider’s S2 medium | Invitrogen | 11720-034 | Add 10% (final) heat-inactivated FBS to make complete medium. | |
| Fetal bovine serum | Invitrogen | 10438026 | heat inactivated | |
| 100x antibiotic solution | MP Biomedicals | 91674049 | contains penicillin (10000 U/mL), streptomycin (10000 μg/mL), and amphotericin B (25 μg/mL) |
|
| Concanavalin A | MP Biomedicals | 195283 | ||
| Formaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15714 | 32% solution | |
| Methanol | Mallinckrodt Baker | 9049 | anhydrous, ACS grade | |
| Molecular sieves | Acros Organics | 19724 | type 3A |
Riferimenti
- Schneider, I. Cell lines derived from late embryonic stages of Drosophila melanogaster. J Embryol Exp Morphol. 27, 353-365 (1972).
- Rogers, S. L., Rogers, G. C. Culture of Drosophila S2 cells and their use for RNAi-mediated loss-of-function studies and immunofluorescence microscopy. Nat Protoc. 3, 606-611 (2008).
- Rogers, S. L., Rogers, G. C., Sharp, D. J., Vale, R. D. Drosophila EB1 is important for proper assembly, dynamics, and positioning of the mitotic spindle. J Cell Biol. 158, 873-884 (2002).
- Goshima, G. Genes required for mitotic spindle assembly in Drosophila S2 cells. Science. 316, 417-421 (2007).
