ソフト筋骨格組織から幹細胞を単離する
Summary
フラスコに細胞の付着の速度に基づいて、筋骨格系の軟部組織から成体幹細胞を単離する。
Abstract
成体幹細胞は、長い再生医療への応用に関して議論されている。成体幹細胞は、多系統の細胞の分化と自己複製能を受けることにより、その印象的な機能に負傷し、病変組織を治療するための興奮を大いに生成している。最も重要なことは、これらの資質は、自家細胞移植療法での使用に有利にしている。現在のプロトコルは、1である筋骨格系の軟部組織、例えば、腱や筋肉、修正されたpreplateのテクニックを読者に紹介する<sup> ST</sup>酵素的に解離し、培地でコラーゲンコーティングしたフラスコ内に配置。培地と、残りの浮遊細胞で構成されている上清を、順次新しいフラスコに毎日転送されます。幹細胞は通常、（シリアル転送またはpreplates）5-7日間かかるているフラスコに付着する最も遅いです。このテクニックを使用することにより、これらの組織中に存在する成体幹細胞は、簡単にかなりの非侵襲的な手続きを経て収穫することができる。
Protocol
Discussion
それはいくつかの成人組織では、複数の幹細胞が含まれていることが認識されている。研究の過去数年間、幹細胞は骨格筋と腱を含む柔らかい筋骨格系組織で検出されている。成功した腱や骨格筋から成体幹細胞を分離するために我々の研究室で使用されている修正preplateのテクニックとして知られているこの現在のプロトコルは、詳細手順を、。細胞上記の変更preplateのテクニックを使用す…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者は、現在のフィルムとスライドの編集上の彼らの助けのための氏カイルホールデン氏とジョナサンルーカスのための細胞分離に与える技術的なヘルプのために氏鷹パンとイアンBellayrの大きく感謝しています。博士：過去数年にわたって修正されたpreplate技術の開発に関わってきた人の、以下の一覧に感謝。 Burhan Gharaibeh、宝洪曹、Deasyブリジット、トーマスR.ペイン、愛平陸、海融鵬、秀樹大島、ボー曽、暁東ムー、Kimimasa飛田、ロンJankowski、Makato池澤。我々は、James H.カミンズ、ライアンPruchnic、ジョセフFeduska、レベッカC. Schugar、海鷹パンとジェシカTebbetsからの技術支援に感謝しています。著者はまた、筋ジストロフィー協会（MDA）、国立衛生研究所（NIH）、国防総省（DOD）、UPMCのピッツバーグの小児病院、科からこの仕事のための財政支援に感謝整形外科、およびピッツバーグ大学。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | #11995-073 | ||
| FBS | Invitrogen | #10437-028 | ||
| Heat-inactivated horse serum | Invitrogen | #26050-088 | ||
| Chick embryo extract | Accurate Chemical | #CE650T-10 | ||
| 100U ml penicillin/streptomycin | Invitrogen | #15140-122 | ||
| Dulbecco’s PBS | Invitrogen | #14190-250 | ||
| Hank’s Buffered Salt Solution | Invitrogen | #24020-117 | ||
| Collagenase type XI 0.2%(wt/vol) | Sigma-Aldrich | #C7657 | ||
| Dispase2.4U ml | Invitrogen | #17105-041 | ||
| Trypsin-EDTA0.5%(wt/vol) (10x;5g liter trypsin (1:250) | Invitrogen | #15400-054 | ||
| Collagen for coating flask : Type I collagen derived from calf skin 0.1 g liter | Sigma-Aldrich | #C-9791 | ||
| DMSO | Sigma | #D-2650 |
Riferimenti
- Gharaibeh, B. Isolation of a slowly adhering cell fraction containing stem cells from murine skeletal muscle by the preplate technique. Nat Protoc. 3, 1501-1509 (2008).
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