Человеческий Т-лимфоцитов изоляции, культуры и анализ миграции In Vitro</em
Summary
Т-лимфоцитов происходит во время миграции самонаведения для лимфоидных органов, выход из сосудистой сети, и вступление в периферических тканях. Здесь мы опишем протокол, который может быть использован для анализа миграции Т-лимфоцитов<em> В пробирке</em>.
Abstract
Миграции Т-лимфоцитов включает в себя клей взаимодействия интегрины клеточной поверхности с лигандами, выраженные на другие клетки или с белками внеклеточного матрикса. Точное пространственно-временной активации интегринов из низком состоянии сродство к высоким сродством состояние на клеточном передний край имеет важное значение для Т-лимфоцитов миграции<sup> 1</sup>. Кроме того, втягивание ячейки задней кромке, или уропод, является необходимым шагом в сохранении стойкие интегрин-зависимые Т-лимфоцитов моторики<sup> 2</sup>. Многие терапевтические подходы к аутоиммунных или воспалительных заболеваний целевой интегринов как средство для подавления чрезмерного найму и миграции лейкоцитов<sup> 3</sup>. Для изучения молекулярных событий, которые регулируют человеческие Т-лимфоцит миграции, мы использовали<em> В пробирке</em> Системы для анализа миграции клеток на двумерной подложке, которая имитирует среду, что Т-лимфоцитов встреч во время набора из сосудов. Т-лимфоциты являются впервые выделен от человека доноров и затем стимулировали и культивировали в течение семи-десяти дней. Во время теста, Т-лимфоциты могут придерживаться и мигрируют на подложке покрытой межклеточной молекулы адгезии-1 (ICAM-1), лиганд для интегрин LFA-1 и стромальных клеток-производных фактора-1 (SDF-1). Наши данные показывают, что Т-лимфоциты обладают миграционных скоростью ~ 15 мкм / мин. Т-лимфоцитов миграция может быть затруднена блокады интегрина<sup> 1</sup> Или ингибиторами клеточный механизм, регулирующий актомиозина миграции клеток<sup> 2</sup>.
Protocol
Discussion
В этом эксперименте мы предоставляем подробную информацию о простой системы для анализа подвижности первичных человеческих Т-лимфоцитов. В анализах пробирке миграции были использованы для рассекать ролей многих молекул и сигнальных путей, участвующих в локомоции различны?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Этот проект был поддержан Национальным институтом здоровья Гранты HL087088 (МК) и HL18208 (МК).
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| RPMI 1640 | Gibco | 11875 | ||
| FBS | Thermo Scientific | SH300070.03 | ||
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140 | ||
| 1-Step Polymorphs | Accurate Chemical | AN221725 | ||
| PHA | Remel/Fisher Scientific | R30852801 | ||
| Rec. human IL-2 | R&D Systems | 202-IL | ||
| Rec. human IL-15 | R&D Systems | 247-IL | ||
| Protein G | Sigma Aldrich | 19459 | ||
| Rec. human ICAM-1/Fc | R&D Systems | 720-IC | ||
| Rec. human SDF-1 | R&D Systems | 350-NS |
Riferimenti
- Hyun, Y. M., Chung, H. L., McGrath, J. L., Waugh, R. E., Kim, M. Activated integrin VLA-4 localizes to the lamellipodia and mediates t cell migration on VCAM-1. J Immunol. 183, 359-369 (2009).
- Morin, N. A., Oakes, P. W., Hyun, Y. M., Lee, D., Chin, Y. E., King, M. R., Springer, T. A., Shimaoka, M., Tang, J. X., Reichner, J. S., Kim, M. Nonmuscle myosin heavy chain IIA mediates integrin LFA-1 de-adhesion during T lymphocyte migration. The Journal of experimental medicine. 205, 195-205 (2008).
- Hyun, Y. M., Lefort, C. T., Kim, M. Leukocyte integrins and their ligand interactions. Immunologic research. , (2009).
