Т-лимфоцитов происходит во время миграции самонаведения для лимфоидных органов, выход из сосудистой сети, и вступление в периферических тканях. Здесь мы опишем протокол, который может быть использован для анализа миграции Т-лимфоцитов<em> В пробирке</em>.
Abstract
Миграции Т-лимфоцитов включает в себя клей взаимодействия интегрины клеточной поверхности с лигандами, выраженные на другие клетки или с белками внеклеточного матрикса. Точное пространственно-временной активации интегринов из низком состоянии сродство к высоким сродством состояние на клеточном передний край имеет важное значение для Т-лимфоцитов миграции<sup> 1</sup>. Кроме того, втягивание ячейки задней кромке, или уропод, является необходимым шагом в сохранении стойкие интегрин-зависимые Т-лимфоцитов моторики<sup> 2</sup>. Многие терапевтические подходы к аутоиммунных или воспалительных заболеваний целевой интегринов как средство для подавления чрезмерного найму и миграции лейкоцитов<sup> 3</sup>. Для изучения молекулярных событий, которые регулируют человеческие Т-лимфоцит миграции, мы использовали<em> В пробирке</em> Системы для анализа миграции клеток на двумерной подложке, которая имитирует среду, что Т-лимфоцитов встреч во время набора из сосудов. Т-лимфоциты являются впервые выделен от человека доноров и затем стимулировали и культивировали в течение семи-десяти дней. Во время теста, Т-лимфоциты могут придерживаться и мигрируют на подложке покрытой межклеточной молекулы адгезии-1 (ICAM-1), лиганд для интегрин LFA-1 и стромальных клеток-производных фактора-1 (SDF-1). Наши данные показывают, что Т-лимфоциты обладают миграционных скоростью ~ 15 мкм / мин. Т-лимфоцитов миграция может быть затруднена блокады интегрина<sup> 1</sup> Или ингибиторами клеточный механизм, регулирующий актомиозина миграции клеток<sup> 2</sup>.
Protocol
1. Выделение лимфоцитов человека Т Получить крови человека от здорового донора. Дайте крови остыть до комнатной температуры (~ 30 мин), прежде чем перейти к следующему шагу. Аккуратно пипетки 3 мл комнатной температуре СМИ Polymorph градиента плотности в 8 мл с круглым дном полистир?…
Discussion
В этом эксперименте мы предоставляем подробную информацию о простой системы для анализа подвижности первичных человеческих Т-лимфоцитов. В анализах пробирке миграции были использованы для рассекать ролей многих молекул и сигнальных путей, участвующих в локомоции различны?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Этот проект был поддержан Национальным институтом здоровья Гранты HL087088 (МК) и HL18208 (МК).