Overview
वीडियो में जेब्राफिश लार्वा के परिहार और थिग्मोटैक्सिस परख का वर्णन किया गया है । वीडियो दृश्य अपरिवर्तनीय उत्तेजना के जवाब में जेब्राफिश लार्वा के व्यवहार की जांच करता है।
Protocol
1. छवि कैप्चर
- प्लेटों की प्रत्येक लेन में 20 लार्वा तक रखा जा सकता है। आमतौर पर प्रति लेन 5 लार्वा का उपयोग तैरने की गति की सबसे सटीक ट्रैकिंग की सुविधा और प्रति प्रयोग आवश्यक लार्वा की संख्या को कम करने के लिए किया जाता है। लेन के साथ या फार्मास्यूटिकल्स या प्रयोग के आधार पर विषाक्त पदार्थों के बिना अंडे के पानी से भरा जा सकता है । हालांकि, लेन को सभी तरह से नहीं भरा जाना चाहिए जब तक कि उन्हें इमेजिंग अलमारियाँ में नहीं रखा जाता है; इससे ओवरफ्लो होने से रोका जा सकेगा। स्थिरता के लिए, लार्वा को एगर उठे मोल्डों में रखे जाने के बाद दस मिनट की अनुकूलन अवधि होनी चाहिए और लैपटॉप स्क्रीन के शीर्ष पर तैनात होना चाहिए। पेट्री डिश से एगर उठे लेन में लार्वा को कुशलतापूर्वक ले जाने से लार्वा तनाव को कम करने में मदद मिलेगी। यह सबसे आसान है जब लार्वा उथले टैंक या पेट्री व्यंजनों में रखे जाते हैं।
- इमेजिंग अलमारियाँ एक कैनन डिजिटल समय चूक फोटोग्राफी और एक लैपटॉप के लिए इस्तेमाल किया कैमरा शामिल हैं । कैमरा कैबिनेट के शीर्ष पर रखा जाना चाहिए और कैबिनेट के नीचे करने की दिशा में जहां एक १५.६ इंच स्क्रीन लैपटॉप स्क्रीन का सामना करना पड़(चित्रा 1)के साथ रखा जाना चाहिए । चार प्लेटों को लैपटॉप स्क्रीन के शीर्ष पर सीधे हाथ से तैनात किया जाना चाहिए। इस समय गलियों को अंडे के पानी या रासायनिक उपचार के साथ सबसे ऊपर किया जा सकता है ताकि यह लेन के शीर्ष के साथ स्तर हो (छवियों में गलियों के किनारों पर छाया को खत्म करने के लिए)।
- एक पावरपॉइंट प्रस्तुति लार्वा के लिए एक अपरिवर्तनीय उत्तेजना के रूप में उपयोग किया जाता है। अतीत में चलती लाल गेंदों को 6 या 12 बहु-वेल प्लेटों में जेब्राफिश लार्वा को दिखाया गया था। वर्तमान पावरपॉइंट 15 मिनट के लिए एक खाली सफेद पृष्ठभूमि के साथ शुरू होता है, इसके बाद प्लेट के शीर्ष आधे हिस्से(चित्रा 2)पर एक चलती लाल पट्टी के 15 मिनट का हिस्सा है। लार्वा को ओवरहीटिंग को खत्म करने के लिए, स्क्रीन तापमान के साथ लैपटॉप खरीदना सबसे अच्छा है जो 28 डिग्री सेल्सियस से ऊपर नहीं जाता है। एगर उठे गलियों के भीतर तरल के वाष्पीकरण से बचने के लिए, अधिकतम इमेजिंग समय को एक घंटे से नीचे रखा जाना चाहिए।
- डिजिटल कैमरा समय चूक फोटोग्राफी के लिए प्रोग्राम किया जाना चाहिए, प्रति प्रयोग ३०० छवियों की कुल के लिए हर 6 सेकंड तस्वीरें ले । हालांकि, आवृत्ति और लंबाई प्रयोग और व्यवहार मात्राकरण के आधार पर समायोजित किया जा सकता है। अतीत में विस्तारित इमेजिंग समय प्रत्येक छवि के बीच लंबे अंतराल का उपयोग कर नियोजित किया गया । कैमरा वीडियो गति (प्रति सेकंड 30 फ्रेम) पर इमेजिंग के लिए एक कम संकल्प पर सेट किया जा सकता है। जबकि कम संकल्प रिकॉर्डिंग को एक मल्टीवेल प्लेट तक सीमित करता है, वीडियो रिकॉर्डिंग तेजी से तैराकी की घटनाओं इमेजिंग के लिए उपयुक्त हैं।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
चित्रा 1. इमेजिंग अलमारियाँ। इमेजिंग अलमारियाँ विशेष रूप से हमारी प्रयोगशाला में बनाया गया था और उच्च थ्रूपुट व्यवहार विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया। लैपटॉप की स्क्रीन के शीर्ष पर रखी मल्टीलेन प्लेटों में लार्वा की समय चूक छवियों को इकट्ठा करने के लिए नीचे की ओर सामना कर रहे कैबिनेट के शीर्ष से 15 मेगापिक्सल का डिजिटल कैमरा जुड़ा हुआ था । प्लेटों और स्क्रीन के बीच एक प्लास्टिक विसारक है जिसका उपयोग एकत्र छवियों में मोइर पैटर्न को रोकने के लिए किया जाता है।
चित्रा 2। खाली पृष्ठभूमि और पावरपॉइंट एवरसिव उत्तेजना। यह वर्तमान पावरपॉइंट है जिसका उपयोग जेब्राफिश लार्वा में व्यवहार परिवर्तन पैदा करने के लिए किया जाता है। यह एक के बीच मजबूत व्यवहार मतभेद प्रदान करता है) खाली पृष्ठभूमि और बी) चलती लाल पट्टी ।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Imaging Cabinets | WoodCraft Towers | ||
| Agarose | Fisher | BP1356-100 | |
| Digital camera | Canon EOS | Rebel T1i | |
| Laptops | Acer Aspire | Any is good as long as it has a 15.6 in. LCD screen with 1366 x 768 pixel resolution and a brightness of 220 cd/m2. | |
| One well plates | Fisher | 12-565-493 | |
| PowerPoint 2010 | Microsoft | ||
| Plastic diffuser | Pendaflex | 52345 |
