Ensayo de membrana del sótano de cultivo 3D: Culturing Cancer Cells on 3D Basement Membrane Protein Matrix to Study Cell Invasion

Published: April 30, 2023

Abstract

Fuente: Cvetković, D., et al. Cuantificación de la invasión celular del cáncer de mama mediante un modelo tridimensional (3D). J. Vis. Exp. (2014).

Este video proporciona una metodología detallada para cultivar células de cáncer de mama en una matriz de proteína de membrana del sótano 3D, ejemplificando el potencial del cultivo 3D en la evaluación de la invasión celular en el entorno circundante.

Protocol

1. Cultivo tridimensional de células de cáncer de mama en matriz de membrana del sótano (la técnica de inserción) Manejo de la matriz de membrana del sótano Matrigel: Descongelar en hielo durante la noche a 4 °C. La matriz de membrana del sótano es líquida a baja temperatura, pero se solidifica a temperatura ambiente. Mantener la matriz de membrana del sótano sobre hielo (Figuras 1A-B). Cubra el plato confocal nº 1 de fondo de vidrio con 50 μl de matriz d…

Representative Results

Figura 1. Cultivo tridimensional de células de cáncer de mama MDA-MB-231 en matriz de membrana del sótano (la técnica de incrustación). A-B) Un esquema de la configuración experimental (realizado en el capó del humo). C) El pozo del plato con fondo de vidrio recubierto con 50 μl de matriz de membrana del sótano. D) Se intentaron colocar platos en una incubadora de cultivo celular (a 37 °C con 5% de CO2) para per…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Materials

35-mm glass-bottomed Confocal No.1 culture dishes MatTek Corporation P35G-1.0-14-C Precooled before use
Bovine serum albumin (BSA) BioShop ALB003.100 Used at 3% for IF
1.5 ml tubes VWR CA10011-700 CA10011-700
100-mm culture dish BD353003 VWR CABD353003 Sterile, disposable
15 ml Falcon tube VWR CA21008-918 Sterile, disposable
1 ml filtered tips VWR 10011-350 Sterile, disposable
200 μl filtered tips VWR 22234-016 Sterile, disposable
20 μl filtered tips VWR 22234-008 Sterile, disposable
Fetal bovine serum (FBS) Sigma F1051 Used at 10% (v/v)
RPMI 1640 Medium with Glutamine Life Technologies 11875-119 Used for culturing of MDA-MB-231 cells
MEGM (bullet kit): MEBM (CC3151)+Single quots (CC4136) Lonza CC-3150 Used for culturing of MCF10A cells
Olympus IX-81 microscope Olympus Used for 3D culture imaging (DIC images at 10X and 40X)

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Citazione di questo articolo
3D Culture Basement Membrane Assay: Culturing Cancer Cells on 3D Basement Membrane Protein Matrix to Study Cell Invasion. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20220, doi: (2023).

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