Visualisierung des embryonalen Nervensystems in Whole-mount Drosophila Embryos
Summary
Wir beschreiben das Verfahren zur Vorbereitung inszeniert<em> Drosophila</em> Embryonen für die Visualisierung des embryonalen Nervensystems während der Embryogenese.
Abstract
Die Drosophila-Embryo ist ein attraktives Modell für die Untersuchung der zellulären und molekularen Grundlagen der neuronalen Entwicklung. Hier beschreiben wir das Verfahren für die Visualisierung von Drosophila embryonalen Nervensystems mit Antikörpern gegen neuronale Proteine. Da die gesamte embryonalen peripheren Nervensystems und des zentralen Nervensystems sind gut auf der Ebene der einzelnen Zellen (..; Bodmer et al, 1987;. Dambly-Chaudière et al, 1986 Bodmer et al, 1989) charakterisiert, jede Aberrationen zu diesen Systemen können leicht identifiziert werden mit Antikörpern gegen verschiedene neuronale Proteine. Die Embryonen sind zu bestimmten Zeiten gesammelt, um sicherzustellen, dass die Embryonen in die richtige Entwicklungsstadien für die Visualisierung sind. Nach dem Sammeln werden die äußeren Schichten des Embryos, das Chorion Membran und der Dotter-Umschlag, der den Embryo umgibt, vor der Fixierung entfernt. Die Embryonen werden dann mit neuronalen Antikörpern und visualisiert mit fluoreszenzmarkierten Sekundärantikörper. Embryos in den Stadien 12-17 visualisiert werden, um die embryonalen Nervensystems zugreifen. Auf Stufe 12 des ZNS Keimstreifs beginnt Verkürzung und von Stufe 15 die endgültige Muster der Kommissur erreicht worden ist. Mit Stufe 17 des ZNS Verträge und die PNS ist voll erschlossen (Campos-Ortega et al. 1985). So Veränderungen in der Struktur des PNS und ZNS können leicht in diesen Entwicklungsstadien beobachtet werden.
Protocol
Discussion
Die Drosophila-Embryo ist ein leistungsstarkes System für die Untersuchung der zellulären und molekularen Veränderungen während der neuronalen Entwicklung. In diesem Protokoll haben wir gezeigt, wie man ganze Berg Embryonen für die Immunhistochemie vorzubereiten. Wir haben dieses Protokoll aus dem Protokoll in Carroll und Scott, 1985, beschrieben angepasst. Dieses Protokoll kann auch angepasst werden andere neuronale Antikörper-Test, sondern die Optimierung von Antikörpern getan werden sollte. Darüber h…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG wird durch Mittel aus der State University of New York at Buffalo und von John R. Oishei Foundation unterstützt.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 37% formaldehyde | Fisher | BP531-25 | ||
| CSP | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
| HRP-FITC | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 323-095-021 | ||
| Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG | Invitrogen | A-11004 | ||
| Vectashield Mounting Medium | Vector Laboratories, Inc. | H-1000 |
Riferimenti
- Bodmer, R., Barbel, S., Sheperd, S., Jack, J. W., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Transformation of sensory organs by mutations of the cut locus of D. melanogaster. Cell. 51, 293-307 (1987).
- Bodmer, R., Carretto, R., Jan, Y. N. Neurogenesis of the peripheral nervous system in Drosophila embryos: DNA replication patterns and cell lineages. Neuron. 3, 21-32 (1989).
- Campos-Ortega, J. A., Hartenstein, V. . The Embryonic Development of Drosophila melanogaster. , (1985).
- Carroll, S. B., Scott, M. P. Localization of the fushi tarazu protein during Drosophila embryogenesis. Cell. 43, 47-57 (1985).
- Dambly-Chaudière, C., Ghysen, A., Jan, Y. N., Jan, L. Y. Muscle connections between imaginal discs in Drosophila. Biologia dello sviluppo. 113, 288-294 (1986).
