Yalıtma ve kalp kapakçığı endotel hücreleri (VEC) saf kültür popülasyonları için bir yöntem sağlar. VEC tüberkülü veya broşürün her iki taraftan da izole edilmiş ve hemen şu olabilir, altta yatan interstisyel hücre (VIC) izolasyonu basittir.
Kalp kapakçıkları, kardiyovasküler sistem üzerinden tek yönlü kan akışını sürdürmek için sadece siz sorumlusunuz. Bu ince, lifli dokuların bir ömrü üzerinden birkaç milyar kez açık ve kapalı olarak önemli bir mekanik streslere maruz kalmaktadır. Bu dokuların inanılmaz bir dayanıklılık endotel yerleşik kapak (VEC) ve interstisyel hücreler nedeniyle (VIC), yerel mekanik ve biyolojik sinyallere yanıt olarak sürekli onarım ve bozulmasina. Sadece son zamanlarda, bu hücrelerin in vitro deneyler önemli bir rol oynamıştır eşsiz davranışları anlamak için başladık . Özellikle zorlu VEC izolasyonu ve kültürü. Özel bakım andan itibaren doku son kaplama ile ev sahibi kaldırılır kullanılması gerekir. Burada doğrudan izolasyon, yan özel izolasyon, kültür ve VEC saf popülasyonlarının doğrulanması için protokoller mevcut. Biz nazik bir çubukla kazıma tekniği ile sadece yüzey hücreleri çıkarmak için enzimatik sindirim kullanın. Bu hücreler daha sonra bir tüp içine toplanır ve bir pelet içine santrifüj. Pelet sonra yeniden bekletildi ve kollajen ben matris ile kaplı öncesi kültür şişeler içine kaplama. Büyüme ve PECAM1 (CD31) gibi endotel spesifik belirteçler ifade inhibe VEC fenotip kişi tarafından onaylandıktan sonra, Von Willebrand Faktör (vWF) ve alfa-düz kas aktin (α-SMA) negatif ifade. VEC fonksiyonel özellikleri, yüksek asetillenmiş LDL düzeyleri ile ilişkilidir. Vasküler endotelyal hücrelerin aksine, VEC normalde embriyonik valf 1 oluşumu sırasında meydana gelen mezenşimin haline dönüştürmek için eşsiz bir kapasiteye sahip. Bu aynı zamanda in vitro kültüründe önemli ölçüde uzamış yazılan konfluent sırasında meydana gelebilir, bu yüzden bakım izdiham veya yakınındaki geçit yapılmalıdır. VEC izolasyondan sonra, VIC saf toplumlarda daha sonra kolayca elde edilebilir.
Kapak biyoloji bir anlayış izole teknik zorluklar ve kapak endotelyal hücrelerin kültür saf popülasyonları tarafından bozulmuş oldu. Tipik izolasyon teknikleri, altta yatan bazal matris veya endotel yapışkan bağları 2,3 kimyasal disosiasyon enzimatik sindirim içerir . Ön izolasyon deneyleri niteliksel disosiasyon ajanlar ve farklı inkübasyon süreleri değerlendirildi. Bu deneylerin sonuçları, 60 dakika kadar EDTA (veya tripsin-EDTA) kuluçka yerinden oynatmamaya hücreleri başarısız old…
The authors have nothing to disclose.
Bu araştırma, NSF KARİYER ödülü, Hartwell Vakfı ve Amerikan Kalp Derneği (# 0830384N) tarafından desteklenmektedir.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Dulbecco’s Modified Eagle Medium | Mediatech | 50-103-PB | ||
Fetal Bovine Serum | Gibco | 26140 | ||
Penicillin Streptomycin | Gibco | 15140-122 | ||
0.25% Trypsin-EDTA | Gibco | 25200 | ||
Heparin Sodium Salt | Sigma-Aldrich | H4784-1G | ||
Collagenase Type 2 | Worthington Biochemical | LS004176 | ||
DPBS | Gibco | 21300-058 | ||
Rat Tail Collagen | BD Biosciences | 354236 | ||
Critical Swabs | VWR | 89031-270 | ||
Sodium Bicarbonate | Sigma-Aldrich | 55761 | ||
T25 Flasks | BD Biosciences | 353018 | ||
T75 Flasks | BD Biosciences | 353136 | ||
24 Well Plate | Falcon | 353047 | ||
60×15 mm Dishes | VWR | 25384-092 | ||
60×15 Glass Dishes | VWR | 89000-310 | ||
Paraffin Embedding Wax | Electron Microscopy Sciences | 19304-01 | ||
Precision Glide Needles | BD Biosciences | 305165 | ||
500 mL Nalgene Filters | VWR | 73520-985 | ||
1L Nalgene Filters | VWR | 73520-986 | ||
Tissue Forceps | Fine Science Tools | 11023-15 | ||
FSC Tweezers #5 | Fine Science Tools | 11295-00 |