अलगाव और एवियन भ्रूणीय वाल्वुलर पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं की संस्कृति
Summary
यह लेख अलग के लिए एक विधि और संवर्धन बटेर या चिकन HH14 प्रदान करेगा<sup> -</sup> वाल्व endocardial कोशिकाओं और HH25 वाल्व तकिया mesenchymal कोशिकाओं.
Abstract
उचित और भ्रूण हृदय वाल्व के गठन समारोह विकासात्मक प्रगति के लिए महत्वपूर्ण है. जल्दी भ्रूण दिल endocardium की एक U-आकार की ट्यूब मायोकार्डियम से घिरा हुआ है. मायोकार्डियम secretes हृदय जेली, एक hyaluronan अमीर atrioventricular जंक्शन (ए वी) और बहिर्वाह पथ लुमेन (ओ एफ टी) में पतला मैट्रिक्स,. HH14 valvulogenesis स्तर पर शुरू होता है जब endocardial कोशिकाओं के एक सबसेट मायोकार्डियम से संकेत प्राप्त करते हैं, mesenchymal परिवर्तन (EMT) के लिए endocardial, गुजरना और हृदय जेली आक्रमण. वाल्वुलर कुशन HH25 स्तर पर पूरी तरह से mesenchymalized कर रहे हैं और यह इस mesenchyme है कि अंततः दिल की वाल्वुलर और septal तंत्र रूपों है. तंत्र है कि शुरू करने और मिलाना EMT और सेल भेदभाव की प्रक्रिया को समझना गंभीर जन्मजात हृदय दोष के लिए अपने कनेक्शन की वजह से महत्वपूर्ण हैं. इस अध्ययन में हम वर्तमान तरीकों पूर्व EMT endocardial और बाद EMT mesenchymal कोशिकाओं है, जो prevalvular तकिया के दो अलग अलग सेल phenotypes कर रहे हैं अलग. प्री – EMT endocardial कोशिकाओं के साथ या मायोकार्डियम बिना सभ्य जा सकता है. डाक EMT ए.वी. तकिया mesenchymal कोशिकाओं के अंदर विवश यंत्रवत् या तनाव मुक्त कोलेजन जैल सुसंस्कृत किया जा सकता है. इन विट्रो मॉडल में इन 3D कुंजी वाल्वुलर morphogenic घटनाओं की नकल और जल्दी और देर चरण valvulogenesis के तंत्र deconstructing के लिए उपयोगी होते हैं.
Protocol
Discussion
HH14 मंच से endocardial कोशिकाओं को अलग करने के लिए विधि – मूल Runyan और Markwald द्वारा विकसित दिल एक नियंत्रित, इन विट्रो के लिए कारक है कि शुरू करने और भ्रूण EMT 2 मिलाना का अध्ययन वातावरण में प्रदान करता है. HH14 …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Mitral 07CVD04: इस शोध Hartwell फाउंडेशन, अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन (वैज्ञानिक विकास अनुदान 0830384N #) और फाउंडेशन Leducq द्वारा समर्थित है.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Extra fine Bonn scissors, curved | Fine Science Tools | 14085-08 | ||
| Dumont tweezers #55 | World Precision Instruments, Inc. | 14099 | ||
| Dumont tweezers #5 | World Precision Instruments, Inc. | 14098 | ||
| Sterile transfer pipettes | Samco Scientific | 2041S | ||
| 4-well culture plates | Nunc | 176740 | ||
| Sterile disposable filter units, PES, 0.2 μm pore size membrane | Nalgene | 566-0020 | ||
| Sterile 15 mL centrifuge tubes | Corning | 430828 | ||
| Sterile petri dishes, 100 mm x 15 mm | VWR International | 25384-342 | ||
| Laboratory tape | VWR International | 89097-920 | ||
| Rat-tail collagen I | BD Biosciences | 354236 | ||
| 10X Earl’s Balanced Salt Solution | Quality Biological, Inc. | 119-064-131 | ||
| M199 powder | Invitrogen | 31100-035 | ||
| Penicillin-Streptomycin | Invitrogen | 15140-122 | ||
| Insulin-Transferrin-Selenium-G supplement (100X) | Invitrogen | 41400-045 | ||
| Chicken serum | Invitrogen | 16110-082 | ||
| 0.25% Trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-056 | ||
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S5761 | ||
| Sodium hydroxide solution, 1.0 N | Sigma-Aldrich | S2770 | ||
| Fertile quail eggs (Coturnix coturnix) | Lake Cumberland Game Bird Farm | |||
| Fertile chicken eggs (Gallus gallus) | Cornell University Poultry Farm |
Riferimenti
- Hamburger, V., Hamilton, H. L. A series of normal stages in the development of the chick embryo. J Morphol. 88, 49-92 (1951).
- Runyan, R. B., Markwald, R. R. Invasion of mesenchyme into three-dimensional collagen gels: A regional and temporal analysis of interaction in embryonic heart tissue. Biologia dello sviluppo. 95, 108-108 (1983).
- Butcher, J. T., Norris, R. A., Hoffman, S., Mjaatvedt, C. H., Markwald, R. R. Periostin promotes atrioventricular mesenchyme matrix invasion and remodeling mediated by integrin signaling through Rho/PI 3-kinase. Biologia dello sviluppo. 302, 256-256 (2007).
