성인 Hippocampal 북극 그라운드 다람쥐 신경 줄기 세포의 성장과 분화
Summary
신경 줄기 세포는 성인이 아닌 최대 절전 모드 예알링 북극 그라운드 다람쥐 (AGS)의 해마에서 준비되었다. 이러한 신경 줄기 세포는 여러 통로를 통해 확장 차별과 glial 문화에 거의 신경 50:50로 유지하실 수 있습니다.
Abstract
북극 그라운드 다람쥐 (Urocitellus parryii, AGS)는 냉동 니어 1 또는 아래 핵심 체온과 최대 절전 모드로 자신의 능력 독특합니다. 이 동물은 또한 생체내 2,3와 산소 – 포도당 체외 4,5에서 빈곤의 뇌에 허혈성 손상에 저항. 이러한 독특한 자질 부상 국소 빈혈로 인한 세포 죽음과 아주 차가운 온도에 저항하는 AGS의 뉴런의 용량을 차지 수있는 고유의 연결 특성을 검사 AGS의 뉴런을 분리하는 자극을 제공했습니다. 확인 단백질 또는 이들 세포의 독특한 속성에 대한 허용 유전자 목표는 허혈성 징후의 번호와 추위 관용의 학습을위한 효과적인 치료법의 발견에 도움 수 있습니다. 성인 AGS의 해마 문화에서 이러한 줄기 세포 쉽게 확장 있도록 분아 따위에 의해 번식이 계속 신경 줄기 세포가 포함되어 있습니다. 우리는 여기서 연구자는 목적의 번호에 대한 이러한 줄기 세포와 차별화된 뉴런을 활용할 수있는 방법을 설명합니다. 밀접하게 다음 단계를 수행하여 AGS 신경 줄기 세포는 두 구절 이상을 통해 확장 가능하고 나누어 세포의 수를 최소화하기 위해 독성 화학 물질을 이용하지 않고 TUJ1 – 긍정적인 뉴런 (~ 50 %)의 높은 문화를 차별. 국소 빈혈은 neurogenesis 6 MEK / ERK 및 PI3K/Akt의 생존 신호 전달 경로 생체내 7과 체외 8 (켈러허 – 앤더슨, 드류 외., 준비)에 국소 빈혈 방지에 기여를 통해 수익금 neurogenesis를 유도. 이러한 고유 신경 세포의 자세한 특성은 이러한 방법의 일부 또는 전부를 사용하여 여러 전선에서 사전하실 수 있습니다.
Protocol
Discussion
AGS 성인 신경 줄기 세포가 견고하고 그 기본적인 신경 줄기 세포 특성의 연구에 대한 신경 줄기 세포의 훌륭한 소스가 만드는 수많은 구절에 대한 확장하실 수 있습니다. 확장 속도가 약 두 배로 모든 이십사시간이지만, 세포 사이의 접촉 astrocytes에 차별을 선호하기 때문에 이러한 세포는 사전에 도달 합류하는 passaged해야합니다. 연락처 – 중재 차별 따라서 차별이 trypsinization하고 통과하기 전에 ?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 미국 육군 의료 연구 및 Materiel 명령 부여 # 05178001로하고 신경 장애 및 뇌졸중의 국립 연구소에서 NS041069 – 06에 의해 지원되었다. 우리는 프로토콜에 도움이 덧글에 대한 조엘 Vonnahme 감사합니다.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| agsNSC | Lifeline | FC-0004 | ||
| agsNSC Expansion kit | Lifeline | LL-0008 | Alternative source for DMEM/F12, B27 and rhFGFb (www.invitrogen.com) | |
| agsNSC differentiation kit | Lifeline | LL-0009 | Alternative source for DMEM/F12 and ITS-x (www.invitrogen.com) | |
| NeuraLife maintenance media kit | Lifeline | LL-0012 | Alternative sources are NeuraBasal (LifeLine) or Neurobasal (in vitrogen), glutamine and B27 (www.invitrogen.com)Differentiated cells are maintained for up to 3 weeks in NeuroLife, but no more than 2 weeks in Neurobasal (www.invitrogen.com) | |
| Micrometer (such as a Bright Line Counting Chamber) | Hausser Scientific | 1490 | http://www.hausserscientific.com/hausserbrightlinedirect.htm | |
| Biocoat Poly-L-Lysine coated 96 well plates | BDBioscience | 356516 | www.bdbiosciences.com | |
| Large orifice pipette tips | Fisher Scientific | 02-707-141 | Avoids neuronal cell damage when pippetting. http://www.fishersci.com |
Riferimenti
- Barnes, B. M. Freeze avoidance in a mammal: body temperatures below 0 degree C in an Arctic hibernator. Science. 244, 1593-1595 (1989).
- Dave, K. R., Prado, R., Raval, A. P., Drew, K. L., Perez-Pinzon, M. A. The Arctic ground squirrel brain is resistant to injury from cardiac arrest during euthermia. Stroke. 37, 1261-1265 (2006).
- Dave, K. R. Protein kinase C epsilon activation delays neuronal depolarization during cardiac arrest in the euthermic arctic ground squirrel. J Neurochem. 110, 1170-1179 (2009).
- Ross, A. P., Christian, S. L., Zhao, H. W., Drew, K. L. Persistent tolerance to oxygen and nutrient deprivation and N-methyl-D-aspartate in cultured hippocampal slices from hibernating Arctic ground squirrel. J Cereb Blood Flow Metab. 26, 1148-1156 (2006).
- Christian, S. L. Arctic ground squirrel (Spermophilus parryii) hippocampal neurons tolerate prolonged oxygen-glucose deprivation and maintain baseline ERK1/2 and JNK activation despite drastic ATP loss. J Cereb Blood Flow Metab. 28, 1307-1319 (2008).
- Jin, K. Evidence for stroke-induced neurogenesis in the human brain. Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 13198-13202 (2006).
- Maysami, S., Lan, J. Q., Minami, M., Simon, R. P. Proliferating progenitor cells: a required cellular element for induction of ischemic tolerance in the brain. J Cereb Blood Flow Metab. 28, 1104-1113 (2008).
- Sung, S. M. Hypoxia/reoxygenation stimulates proliferation through PKC-dependent activation of ERK and Akt in mouse neural progenitor cells. Neurochem Res. 32, 1932-1939 (2007).
- Brewer, G. J. Isolation and culture of adult rat hippocampal neurons. J Neurosci Methods. 71, 143-155 (1997).
- Palmer, T. D., Takahashi, J., Gage, F. H. The adult rat hippocampus contains primordial neural stem cells. Mol Cell Neurosci. 8, 389-404 (1997).
