분리 및 체외에서 활성화 Caenorhabditis 엘레간스 정자
Summary
남성에서 spermatids을 분리하고 활성화하기위한 프로토콜<em> C. 엘레간스</em> 여기에 설명되어 있습니다. 남성 자료 spermatids의 뒷부분 끝을 절단. spermatids은 프로 테아제를 추가로 활성화할 수 있습니다.
Abstract
남성과 나온것은 선충류 C. 엘레간스에있는 두 자연스럽게 발견 성적 양식입니다. amoeboid 정자는 남성과 나온것 모두에 의해 생성됩니다. 300 – – gametogenesis의 이전 단계에서 나온것의 배아 세포는 정자의 제한 번호로 차별과 spermatheca라는 작은 '가방'에 저장됩니다. 나중에, 지속 oocytes 1 생산 나온것. 반면, 남성들은 성인에 걸쳐 독점적으로 정자 생산하고 있습니다. 남성은 전형적인 성인 웜 2 전체 세포의> 50 %를 차지하고 그 많은 정자를 생산하고 있습니다. 따라서 남성의 정자를 분리하는 것은 나온것의에서보다 쉽습니다.
남성의 극소수는 자연의 X 염색체 3 자연 이외의 분리로 인해 생성됩니다. 보다 편리하게 남성 또는 그에게 상승을주는 돌연변이의 소개 (수컷의 높은 발병률) 표현형로 나온것 크로싱하면 그 중 하나가 남성 인구 3 풍부 수있는을 통해 전략의 일부입니다.
남성은 쉽게 꼬리 형태 4을 관찰하여 나온것 구별하실 수 있습니다. 남성 꼬리가 짝짓기 구조 둥근 반면 남녀 추니 꼬리는 지적이다.
꼬리를 잘랐다 남성의 생식 요로 내에 저장된 spermatids의 수많은 출시. 해부가 27 게이지 바늘을 사용하여 스테레오 현미경으로 수행됩니다. spermatids가 실제로 다른 세포와 연결되지 않은 상태 때문에, 유압 압력 spermatids이 남성을 포함한 신체의 내부 내용을 퇴학.
말스 직접 '정자 보통'의 작은 방울을 해부하고 있습니다. Spermatids는 산도의 변경에 민감합니다. 따라서 HEPES, 좋은 버퍼링 용량을 가진 화합물은 정자 미디어에서 사용됩니다. 포도당과 정자 매체에있는 다른 소금은 정자의 무결성을 유지하기 위해 삼투압을 유지할 수 있도록 도와주십시오.
마리의 정자 수야에 spermatids의 포스트 meiotic 분화는 spermiogenesis 또는 정자의 정품 인증을 칭했다있다. 5 쉐익스하고, 넬슨 6 이전 라운드 spermatids 여기서 우리는 C.의 체외 spermiogenesis에서 보여주는 Pronase E. 등 다양한 활성화 화합물을 추가하여 마리의 정자 수야으로 차별화할 수있는 유도했다 Pronase E.을 사용 엘레간스의 spermatids
성공 spermiogenesis 임신을위한 필수 조건이며 따라서 spermiogenesis에 결함이 돌연변이 멸균됩니다. 지금까지 여러 가지 돌연변이가 특별히 spermiogenesis 과정 7 결함이 표시되었습니다. 이상은 소설 Spe (Spermatogenesis 결함)의 체외 활성화에 돌연변이 우리가이 행사에 참여 추가 선수를 발견할 도움이 될 중에 발견했습니다.
Protocol
Discussion
Spe 돌연변을 분석뿐만 아니라,이 프로토콜은 노화와 정자의 형태를 분석과 같은 다른 중요한 응용 프로그램을 가지고 있습니다. 이 프로토콜을 사용 Spermatids과 격리 마리의 정자 수야는 야생 타입과 돌연변이 정자 8, 9, 슬라이드 10, 생리적 측정 9, 11, 또는 인공 수정 12 정자의 운동성의 immunostaining 같은 다른 스트림 실험에서 사용할 수 있습니다.
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 사무엘 구청 감사, 다이앤 C.이 기술을 개척을위한 쉐익스과 그레고리 넬슨. 우리는 활성 마리의 정자 수야을 보여주는 동영상을위한 파반 Kadandale와 브라이언 Geldziler 감사, 도움이 토론에 대한 Singson 연구실의 구성원, CGC 종자와 NIH에 대한 권한을 부여 (R01HD054681)를 통해 우리를 지원하십시오.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Tuberculin syringe | Becton Dickinson | 309623 | Syringe: 1 ml, needle: 27G X ½ in |
|
| Pap pen | Zymed | 00-8888 | ||
| VWR VistaVision HistoBond Microscope Slides |
VWR International | 16004-406 | Dimension: 75X25X1mm |
|
| Cover glass | VWR International | 48366045 | ||
| Protease | Sigma | P-6911 |
Riferimenti
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