Summary

计算机辅助大型胰岛质量,粒度分布和结构的可视化和量化

Published: March 04, 2011
doi:

Summary

介绍了新型计算机辅助大型采购及免疫组织化学染色的胰腺癌标本的分析方法:(1)虚拟切片捕捉整个节(2)大规模数据的质量分析;(3)重建二维虚拟切片(4)三维胰岛映射;(5)数学分析。

Abstract

胰岛是一个独特的微型几种激素的分泌,如β细胞(胰岛素),α-细胞(胰高血糖素),和delta -细胞(生长抑素)中嵌入外分泌组织,包括1内分泌细胞组成的器官 – 整个胰腺的2%。身体和胰腺重量之间有一个密切相关。总β细胞的质量也相应增大,以弥补在体内对胰岛素的需求。逃脱此相称的扩张是胰岛的粒度分布。大型动物,如人类有着相似的小鼠胰岛与粒度分布,表明这种微型器官具有一定规模的限制功能。的大型动物胰腺无法产生比例较大的胰岛细胞的胰岛细胞数量增加,增幅较大的胰岛细胞在其整体的胰岛大小分布比例补偿。此外,胰岛内细胞成分和不同物种之间的架构,也表现出各种病理生理条件下的同一物种的一个惊人的可塑性。在本研究中,我们描述了生物图像数据分析的新方法,以便分析过程的自动化,允许大,异构的数据集合,在这种动态的生物过程和复杂的结构的研究分析。这些研究受到阻碍,由于偏见的抽样技术困难,并产生大规模的数据集,能够精确地捕捉胰岛生物学的生物过程的复杂性。在这里,我们显示的方法收集样本有限(或尽量减少样品的采集)和标准的实验设置内不偏不倚的“代表”的数据,并精确地分析复杂的三维结构的胰岛。计算机辅助自动化允许的收集和分析大规模数据集,并保证数据的公正解释。此外,胰岛的粒度分布和空间坐标(即X,Y,Z轴位置)的精确量化,不仅会导致一个准确的可视化胰岛的结构和组成,但也使我们能够确定在开发过程中和适应的模式改变条件通过数学建模。在这项研究中开发的方法以及许多其他系统和生物体的研究。

Protocol

1。创建虚拟切片的免疫组织化学染色图像打开StereoInvestigator。在显微镜持有人持有样品放入干净的幻灯片和“收购”,然后点击“即时影像”(收购→现场图像),可视化立体声调查。确定每个通道的暴露水平;在我们具体的例子,通道2的DAPI,通道的GFP,RFP的通道,通道5 4 3 Cy5的通道6用于Cy7。使用“视频直方图”窗口,其中显示的荧光强度,以确定曝光量。适当的荧光强度达到强度尾巴…

Discussion

计算机辅助大型可视化和量化这里介绍负担胰岛研究的四个重点:(1)大规模的胰腺标本的分析提供了一个全面的整体胰岛大小的分布和胰岛结构。 (2)细胞的组成和结构的三维重建和数学分析,进一步促进内的胰岛内分泌细胞的空间安排的考试。 (3)引人注目的胰岛可塑性可能会建议在不同物种间和各种病理生理条件下的同一物种进化收购代谢的变化的适应,而不是物种的差异。 (4)重排…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

支持这项研究是由美国公众卫生服务补助DK – 081527,DK – 072473和DK – 20595芝加哥糖尿病研究和培训中心(动物模型核心)的大学,Kovler家庭基金会的礼物。

Materials

Material Name Tipo Company Catalogue Number Comment
Fluorescent microscope Microscope Olympus IX-81  
Stereo Investigator Program MicroBrightField    
MIP-GFP mice Mice Jackson Laboratory    
Mathematica Program Wolfram    
Image J Program NIH    
Slidebook   Program Olympus  

Riferimenti

  1. Steiner, D. J., Kim, A., Miller, K., Hara, M. Pancreatic islet plasticity – Interspecies comparison of islet architecture and composition. ISLETS. 2, 135-145 (2010).
  2. Kim, A., Miller, K., Jo, J., Wojcik, P. l., Kilimnik, G., Hara, M. Islet architecture – a comparative study. ISLETS. 1, 129-136 (2009).
  3. Kilimnik, G., Kim, A., Jo, J., Miller, K., Hara, M. Quantification of pancreatic islet distribution in situ in mice. Am J Physiol Endocrinol Metab. 297, E1331-E1338 (2009).
  4. Hara, M., Dizon, R. F., Glick, B. S., Lee, C. S., Kaestner, K. H., Piston, D. W., Bindokas, V. P. Imaging pancreatic beta-cells in the intact pancreas. Am J Physiol Endocrinol Metab. 290, E1041-E1047 (2006).
  5. Hara, M., Wang, X., Kawamura, T., Bindokas, V. P., Dizon, R. F., Alcoser, S. Y., Magnuson, M. A., Bell, G. I. Transgenic mice with green fluorescent protein-labeled pancreatic beta -cells. Am J Physiol Endocrinol Metab. 284, E177-E183 (2003).
check_url/it/2471?article_type=t

Play Video

Citazione di questo articolo
Kim, A., Kilimnik, G., Guo, C., Sung, J., Jo, J., Periwal, V., Witkowski, P., Dilorio, P., Hara, M. Computer-assisted Large-scale Visualization and Quantification of Pancreatic Islet Mass, Size Distribution and Architecture. J. Vis. Exp. (49), e2471, doi:10.3791/2471 (2011).

View Video