dsRNAをインジェクションによるRNAiの干渉にショウジョウバエ胚
Summary
RNA干渉は、遺伝子の機能を解析することは非常に効果的であることが証明されています<em>ショウジョウバエ</em>気管開発。ノックダウンの遺伝子発現にハエの胚にdsRNAを注入する江研究室で使用されている詳細なプロトコールが示されている。この手法はで組織や臓器の開発に必要なスクリーニングの遺伝子の可能性を秘めている<em>ショウジョウバエ</em>。
Abstract
遺伝学的スクリーニングは、複雑な生物学的プロセス1への洞察を得るための最も強力な方法の一つである。年間で遺伝子操作のための多くの改良とツールは、 ショウジョウバエ 2で利用可能となっている。すぐに二本鎖RNAをノックダウンするために線虫（Caenorhabditis elegans）における個々の遺伝子の活動を使用することができることFrieとメロ3で最初の発見の後、RNA干渉（RNAi）は、 ショウジョウバエ器官開発における遺伝子機能を解析するための強力な逆遺伝学的なアプローチを提供することが示された4、5。
肺、腎臓、肝臓、および血管系を含む多くの臓器は、輸送の重要な液体や気体6、7、その分岐した管状のネットワークで構成されています。 ショウジョウバエ気管形成の分析は、他の管状の臓器8の形態形成を研究するための優れたモデルシステムを提供します。バークレーショウジョウバエゲノムプロジェクトでは、気管系で発現される遺伝子の数百を明らかにした。管形成の分子細胞メカニズムを調べるために、課題は、気管の発生におけるこれらの遺伝子の役割を理解することです。ここでは、ノックダウン、個々の遺伝子発現へのショウジョウバエの胚にdsRNAをインジェクションの詳細な方法を説明した。私たちは正常にdsRNAを注射により内因性dysfusion（dys）遺伝子の発現をノックダウン。 Dysは気管融合細胞で発現のbHLH – PASタンパク質であり、そしてそれが気管分岐融合9、10が必要です。悪RNAiは、完全にdysの発現を排除し、気管の融合の欠陥をもたらした。この比較的単純な方法は、 ショウジョウバエのtissureと臓器の開発のためのrequried遺伝子を同定するためのツールが用意されています。
Protocol
Discussion
dsRNAの注入法の存在はここにショウジョウバエ気管開発における遺伝子機能の非常に敏感かつ迅速な分析が可能になります。このメソッドは、潜在的に他の組織や臓器の開発のための遺伝子機能の解析に適用することができます。
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者らはdysfusion cDNAを、Dys抗体とw 1118ハエのためにスティーブンクルーズを感謝したいと思います。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Halocarbon oil 700 | Sigma-Aldrich | H8898 | ||
| Picospritzer III picopump | Parker Precision Fluidics | 051-0500-900 | ||
| Micro-pipettes | Fisher | 21170M | ||
| Microloaders | Eppendorf | 930001007 |
Riferimenti
- St Johnston, D., Nusslein-Volhard, C. The origin of pattern and polarity in the Drosophila embryo. Cell. 68, 201-219 (1992).
- Venken, K. J., Bellen, H. J. Emerging technologies for gene manipulation in Drosophila melanogaster. Nat. Rev. Genet. 6, 167-178 (2005).
- Fire, A. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 391, 806-811 (1998).
- Kennerdell, J. R., Carthew, R. W. Use of dsRNA-mediated genetic interference to demonstrate that frizzled and frizzled 2 act in the wingless pathway. Cell. 95, 1017-1026 (1998).
- Misquitta, L., Paterson, B. M. Targeted disruption of gene function in Drosophila by RNA interference (RNA-i): a role for nautilus in embryonic somatic muscle formation. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 96, 1451-1456 (1999).
- Horowitz, A., Simons, M. Branching morphogenesis. Circ. Res. 103, 784-795 (2008).
- Hogan, B. L., Kolodziej, P. A. Organogenesis: molecular mechanisms of tubulogenesis. Nat. Rev. Genet. 3, 513-523 (2002).
- Ghabrial, A., Luschnig, S., Metzstein, M. M., Krasnow, M. A. Branching morphogenesis of the Drosophila tracheal system. Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 19, 623-647 (2003).
- Jiang, L., Crews, S. T. Dysfusion transcriptional control of Drosophila tracheal migration, adhesion, and fusion. Mol. Cell. Biol. 26, 6547-6556 (2006).
- Jiang, L., Crews, S. T. The Drosophila dysfusion basic helix-loop-helix (bHLH)-PAS gene controls tracheal fusion and levels of the trachealess bHLH-PAS protein. Mol. Cell. Biol. 23, 5625-5637 (2003).
