RNAi Störningar av dsRNA Injektion i Drosophila Embryon

Summary

RNA-interferens har visat sig mycket effektiva för att analysera geners funktion i<em> Drosophila</em> Luftrör utveckling. En detaljerad protokoll som används av Jiangs lab att injicera dsRNA in flyga embryon till ÖVERVÄLDIGANDE genuttryck illustreras. Denna teknik har potential för screening gener som krävs för vävnader och organ utveckling i<em> Drosophila</em>.

Abstract

Genetisk screening är ett av de mest kraftfulla metoder som finns för att få insikter i komplexa biologiska processen ^1. Genom åren har många förbättringar och verktyg för genetisk manipulation har blivit tillgängliga i Drosophila ^2. Strax efter den första upptäckten av Frie och Mello ³ att dubbelsträngat RNA kan användas för att ÖVERVÄLDIGANDE aktiviteten av enskilda gener i Caenorhabditis elegans, RNA-interferens (RNAi) har visat sig ge en kraftfull omvänd genetisk metod att analysera gener funktioner i Drosophila organutveckling ^{4, 5.}

Många organ, inklusive lungor, njurar, lever och kärlsystemet, består av förgrenade tubulära nät som transporterar viktiga vätskor eller gaser ^{6, 7.} Analysen av Drosophila trakeal bildas ger ett utmärkt modellsystem för att studera morfogenes andra tubulära organ ^8. The Berkeley Drosophila Genome Project har avslöjat hundratals gener som uttrycks i trakeal systemet. För att studera molekylära och cellulära mekanismer av röret bildas, är utmaningen att förstå funktionen hos dessa gener i trakeal utveckling. Här beskrev vi en detaljerad metod för dsRNA injektion i Drosophila embryo till ÖVERVÄLDIGANDE enskilda genuttryck. Vi knackade framgångsrikt ner endogena dysfusion (dys) genuttrycket dsRNA injektion. Dys är en bHLH-PAS proteinet uttrycks i luftrör fusion celler, och det krävs för endotrakeal gren fusion ^{9, 10.} dys-RNAi elimineras helt dys uttryck och resulterade i luftstrupen fusion defekt. Denna relativt enkla metod ger ett verktyg för att identifiera gener requried för tissure och organ utveckling i Drosophila.

Protocol

1. Embryosamlings Sätt upp burar vid 25 ° C med 2-4 dagsgamla w 1118 plattor flies.Grape juice ändras varje timme under dagen för att synkronisera insamling av ägg under 1-2 dagar innan insamlingen Samla embryon för 1 timme vid 25 ° C Skär en rektangulär bit av druvsaft agar, skär lätt i mitten med ett rakblad, lämna en rad i agar Använd en metall sond för att överföra embryon från druvsaft tallriken till din del av druvsaft agar, rada upp dem i en rak…

Discussion

Den dsRNA injektionsmetod närvarande gör här en mycket känslig och snabb analys av geners funktion i Drosophila trakeal utveckling. Denna metod kan potentiellt användas för att analysera geners funktion för andra vävnader och organ utveckling.

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Halocarbon oil 700		Sigma-Aldrich	H8898
Picospritzer III picopump		Parker Precision Fluidics	051-0500-900
Micro-pipettes		Fisher	21170M
Microloaders		Eppendorf	930001007