يوصف استخدام نظم microvolume NanoDrop كبدائل عملية وفعالة للحمض النووي التقليدية من خلال منهجية الكميات المظاهرة اثنين من بروتوكولات الكميات microvolume النووية الحمضية.
ويجري باستمرار المقايسات الجزيئية البيولوجية المتقدمة التي تستخدم كميات صغيرة من المواد تدريجيا ، غالبا ما يحول دون استخدام الأدوات التقليدية المستندة كفيت عن الكميات الحمض النووي لتلك التي يمكن أن تؤدي الكميات microvolume.
العينة microvolume NanoDrop نظام الاستبقاء (المنتجات الحرارية NanoDrop العلمية) من خلال الجمع بين وظائف تكنولوجيا الألياف البصرية ، والخصائص الطبيعية التوتر السطحي لالتقاط والاحتفاظ بها كميات ضئيلة من عينة مستقلة عن أجهزة الاحتواء التقليدية مثل cuvettes أو الشعيرات الدموية. وعلاوة على ذلك ، فإن النظام يعمل طول مسار أقصر ، مما يؤدي إلى طائفة واسعة من قياسات تركيز حمض النووي ، والقضاء اساسا على الحاجة إلى إجراء التخفيفات. تخفيض حجم العينة المطلوبة لتحليل الطيفي تسهل أيضا إدراج خطوات إضافية لمراقبة الجودة في جميع أنحاء سير العمل الجزيئية كثيرة ، وزيادة كفاءة ويؤدي في نهاية المطاف إلى مزيد من الثقة في النتائج النهائية.
وقد برزت الحاجة إلى حساسية عالية من التحليل الشامل الفلورسنت محدودة أيضا مع التقدم التجريبية الاخيرة. باستخدام التكنولوجيا نفسها microvolume الاحتفاظ عينة ، قد يتم تنفيذ قياسات الفلورسنت مع 2 ميكرولتر من المواد ، مما يسمح الفلورسنت متطلبات حجم المقايسات خفضت بشكل ملحوظ. microreactions هذه ميكرولتر من 10 أو أقل من الممكن الآن استخدام fluorospectrometer microvolume مخصص.
سيظهر اثنين microvolume الكميات الحمض النووي البروتوكولات التي تستخدم نظم متكاملة الاحتفاظ العينة كما بدائل عملية لبروتوكولات كفيت التقليدية القائمة. الأول ، هو وصف لطريقة مباشرة الامتصاصية A260 باستخدام معمل microvolume. اعقب ذلك عرض لطريقة مضان على أساس أنه يتيح تقليص حجم وتفاعلات مع مضان fluorospectrometer microvolume. هذه التقنيات الجديدة تمكن من تقييم تركيز الحمض النووي التي تتراوح بين 1 بيكوغرام / ميكرولتر إلى 15000 نانوغرام / ميكرولتر مع استهلاك الحد الأدنى من العينة.
تستند بروتوكولات الكميات المعروضة هنا على أنظمة microvolume الأكثر قبولا على نطاق واسع. مثل هذه الأنظمة توفير بدائل عملية للحمض النووي المنهجية التقليدية الكميات ، التي تعتمد على كميات أكبر من العينات واستخدام أجهزة الاحتواء.
NanoDrop microvolume توظف التكنولوجيا نظام الاحتفاظ العينة التي تعتمد على خصائص التوتر السطحي من العينة التي يجري قياسها على شكل عمود السائل. فمن الضروري أن العينة يجعل الاتصال مع قياس السطوح البصرية العلوي والسفلي لتشكيل العمود المناسب. إذا في أي نقطة من نتائج القياس يبدو غير صحيحة أو لا يمكن استنساخه ، فمن الأرجح نتيجة عدم التجانس أو عينة السائل كسر العمود.
لا ينصح المنظفات ومواد التنظيف ايزوبروبيل لأنها قد uncondition السطوح قياس التمثال. ورمى دون شروط يحدث عندما تعرضت لما يثير الشبهة خصائص سطح مسعور من التمثال ، مما أدى إلى تسطيح للقطيرة عينة. ويمكن أن يؤدي إلى الركائز دون شروط كسر العمود السائل خلال القياس.
ويتميز الشكل 3. السطح دون شروط من قبل تسطيح قطرات المياه.
قد تكون مجددة السطوح رمى به Uncondtioned NanoDrop مجمع الركيزة تجديد (PR – 1 ، الحرارية العلمية منتجات NanoDrop). يتم تطبيق طبقة رقيقة من مجمع مساحته إلى السطوح رمى العلوي والسفلي ، سمح لتجف لمدة 30 ثانية ~ ، ثم يفرك قبالة باستخدام جافة ونظيفة وخالية من الوبر مختبر المسح. وتتميز حالة مجددة بنجاح بواسطة قطرات المياه الديكور حتى عندما يطبق إلى أسفل سطح التمثال.
الشكل 4. يتميز سطح مجددة من الديكور تتكون من قطرات الماء.
نظم الكميات Microvolume الحد بشكل كبير من استهلاك العينة وزيادة كبيرة في نطاق التركيز عند مقارنة لأنظمة القياس الكمي أكثر تقليدية. على الرغم من أن الكميات microvolume أصبحت في كثير من الأحيان عبارة عن تقنية تمكن من الظروف التي تنطوي على محدودية كتلة الخلية مثل إبرة الخزعات وmicrodissection الليزر التقاط والكفاءة وسهولة استخدام هذه المنهجية قد جعل من بديل لقبول التقليدية على نطاق واسع الكميات حمض النووي حتى طرق عندما عينة وفيرة.
The authors have nothing to disclose.
ريتشارد دبليو برنجر وديفيد آش L. ، تطبيقات العلماء ، والمنتجات الحرارية NanoDrop العلمية ، للحصول على المساعدة الفنية والتصوير.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
NanoDrop 2000c | Thermo Fisher Scientific | ND-2000C | ||
NanoDrop 3300 | Thermo Fisher Scientific | ND-3300 |