التصوير تلألؤ بيولوجي لتقييم الاستجابات المناعية عقب زرع أنسجة القلب المهندسة (EHT)
Summary
هذا الفيديو يوضح استخدام<em> في الجسم الحي</em> التصوير تلألؤ بيولوجي لدراسة الاستجابات المناعية بعد زرع أنسجة القلب المهندسة (EHT) في الفئران.
Abstract
واتبعت أساليب مختلفة للهندسة الأنسجة القلبية في العقود الماضية بما في ذلك استراتيجيات السقالات باستخدام المواد الأصلية أو الحيوي الصناعي سقالة ، انحباس myocytes القلب في الهلاميات المائية مثل الليفين أو الكولاجين والتراص من monolayers العضلية 1. هذه المفاهيم تهدف إلى استعادة وظيفة القلب للخطر (على سبيل المثال بعد احتشاء عضلة القلب) أو نماذج تجريبية (مثل علم السموم التنبؤي وفحص مادة أو النمذجة المرض). الرصد الدقيق للبقاء على قيد الحياة بعد زرع خلايا أنسجة القلب هندسيا (EHT) أصبح من الممكن الآن استخدام التقنيات في الجسم الحي ، تلألؤ بيولوجي (BLI) التصوير 2. نحن هنا وصف جيل من الليفين المستندة EHT الفئران من سلالة معدلة وراثيا مع التعبير في كل مكان من luciferase يراعة (ROSA / تيراغرام luciferase – LEW ؛ 3). يتم تنفيذ غرس في أكبر سلالات الفئران الثرب مختلفة لتقييم الاستجابات المناعية للكائن المتلقي التالية زرع EHT. المقارنة بين النتائج التي تم إنشاؤها بواسطة BLI وانزيم مرتبط تقنيات سبوت المناعي (ELISPOT) تأكيد قابليتها للBLI لتقييم الاستجابات المناعية.
Protocol
Discussion
قبل التنفيذ السريرية التكنولوجيا EHT لإصلاح القلب ، والمسائل الأساسية مثل استمناع كل من المكونات الخلوية والمصفوفة أو البقاء على قيد الحياة بعد زرع الفساد تحتاج إلى تقييم في النماذج التجريبية. التصوير داخل الجسم الحي تلألؤ بيولوجي يمثل تقنية جديدة مفيدة للبقاء …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
تلقى سونيا Schrepfer ، كونرادي لينارد وارني هانسن التمويل من (DFG ؛ SCHR992/3-1 ، SCHR992/4-1 ، CO 858/1-1 ، HA 3423/3-1) دويتشه Forschungsgemeinschaft. وأيد أيضا العمل من خلال المنح المقدمة من الاتحاد الأوروبي لEschenhagen توماس (EUGeneHeart وAngioscaff).
Materials
- LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor-luc)11Jmsk rats (NBPR rat number 0299, http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/)
- Bovine fibrinogen (stock solution: 200 mg/ml plus aprotinin 5 μg/ml fibrinogen in NaCl 0.9%, Sigma F4753)
- Matrigel (BD Bioscience 356235)
- DMEM (Biochrome F0415)
- Horse serum (Gibco 26050)
- Penicillin/streptomycin (Gibco 15140)
- Insulin (Sigma-Aldrich I9278)
- Aprotinin (Sigma Aldrich A1153)
- d-Luciferin (Biosynth L-8220)
- Enzyme-linked immunosorbent spot (ELISpot) assay plates (Hassa Laborbedarf, S2EM004M99)
Riferimenti
- Eschenhagen, T., Zimmermann, W. H. Engineering myocardial tissue. Circ Res. 97, 1220-1231 (2005).
- van der Bogt, K. E., Schrepfer, S., Yu, J. Comparison of transplantation of adipose tissue- and bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the infarcted heart. Transplantation. 87, 642-652 (2009).
- Hakamata, Y., Murakami, T., Kobayashi, E. “Firefly rats” as an organ/cellular source for long-term in vivo bioluminescent imaging. Transplantation. 81, 1179-1184 (2006).
- Hansen, A., Eder, A. Development of a Drug Screening Platform Based on Engineered Heart Tissue. Circ Res. , (2010).
