Autopsie de diagnostic et de certains tissus et de collecte des échantillons dans les rats et les souris
Summary
Cet article décrit les procédures permettant d'effectuer un examen post-mortem de base d'une souris ou un rat, et la collecte des organes de base, ainsi que plusieurs types d'échantillons difficiles à partir de l'évaluation histologique, microbiologique et la PCR.
Abstract
Il ya différents types d'échantillons multiples qui peuvent être recueillies à partir d'un animal euthanasié en vue d'aider à diagnostiquer ou de découvrir des agents infectieux dans une colonie d'animaux. Le ramassage des tissus pour le traitement histologique supplémentaires peuvent influer sur la qualité des résultats des tests. Cet article décrit le comportement d'un examen de base brut, y compris l'identification de coeur, le foie, les poumons, les reins et la rate, ainsi que la manière de collecter ces organes. Par ailleurs quatre des techniques plus difficiles la collecte de tissus / échantillon sont démontrés. La collecte et la perfusion du poumon peut être particulièrement difficile car le tissu doit être bien gonflés avec un fixatif pour que l'intérieur du tissu à fixer correctement et approfondie pour permettre l'évaluation histologique. Cet article montre étape par étape pour supprimer la technique du poumon et le gonfler avec fixateur afin d'obtenir une fixation optimale du tissu dans les 24 heures. La collecte du cerveau peut être également difficile car le tissu est doux et facilement endommagée. Cet article montre étape par étape la technique d'exposer et de retirer le cerveau du crâne avec des dommages minimaux aux tissus. Les ganglions mésentériques est un type bon échantillon dans lequel de nombreuses communes de détecter les agents infectieux comme les virus entériques persister plus longtemps dans les ganglions lymphatiques que ce qu'ils sont excrétés dans les selles. Cet article démontre l'procédure étape par étape pour localiser et retirer aseptiquement le ganglion mésentérique. Enfin, l'identification des agents infectieux des voies respiratoires peut être effectuée par culture bactérienne ou des tests PCR de nasale et / ou bronchique fluides aspirats prélevés à l'autopsie. Cette procédure décrit l'obtention et la préparation de l'échantillon d'aspiration des voies respiratoires pour la culture bactérienne et tests de PCR.
Protocol
Discussion
La collecte des données à la fin de l'étude peut exiger un examen post-mortem des animaux. Décrivent bien ce qui est vu et n'oubliez pas d'examiner tous les tissus. Ces procédures sont principalement conçus pour optimiser l'autopsie et de collecte de l'échantillon pour la surveillance des maladies infectieuses, mais la plupart sont facilement adaptés aux enquêtes ont porté sur les incidents suspects de maladie ou d'épidémies dans laquelle peut-être seulement un sous-ensemble des proc…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Reagent name | Company | Catalog number | Comments |
|---|---|---|---|
| Cutting board | Thermo Electron Corp Cat #36114 | Cat #36114 | |
| Small scissors | ROBOZ | RS-5910, G204 | 23mm blades, 3.5″ length, straight |
| Medium scissors | ROBOZ | RS-6808, G207 | 5″ |
| Large scissors | ROBOZ | RS-6826, G65″ | 6.25″ |
| Forceps-Curved | ROBOZ | RS-8254 (M1/21004) | 4.5″, serrated, slight curve |
| Forceps-Microdissecting | ROBOZ | RS-5238 | Hudson-(EWALD) |
| Forceps-Tissue Forceps | ROBOZ | RS–8160 | Rat tooth |
| Flame sterilizer | Oxford Labware Products | Bacti-Cinerator #5889-001007 | |
| Scalpel | Cancer Diagnostics, Inc. | Finger Scalpels #60, Cat#FS0060 | |
| Pipettes | VWR | Pasteur Pipet 5 3/4″, Cat#14672-400 | |
| Autoclave bags | Propper Manufacturing Company | Sterilizer Bag Paper Pouches Cat#021002(3100923)E09110 | For Pasteur pipettes |
| Pipette bulb | VWR | Cat#56310-240 | |
| Eppendorf tubes | Sarstedt | SafeSeal microtube 2mL, Ref#72.695 | |
| Eppendorf tubes | Argos | 5mL microtube Cat#T20765-C | |
| Syringe | BD (Beckton Dickenson) | 1ml-309602 3 ml-300910 5ml-309603 10mL Cat#309604 20mL Cat#309661 | |
| Needles | BD | 26G-309625 18G-305195 | |
| Neutral buffered formalin | VWR | 20L 10% NBF, Cat#16004-128 | |
| Saline | ThermoScientific | Buffered Blood Bank Saline, Cat#23-309-178 | |
| Trypticase soy broth | Becton Dickenson | TSB: Dehydrated, Cat#211825 | |
| Phosphate buffered saline | Sigma Aldrich | HA Buffer, Cat#P3813-10PAK | |
| Formalin cups | VWR | 4oz Cat#36318-852 8oz Cat#36318-860 16oz Cat#36318-858 | |
| Large formalin cups | OakRidge Products | 32oz container Cat#0432-1100 | |
| Extra large formalin cup | VWR | HDPE Multipurpose 160oz container Cat#89038-282 | |
| Suture material | Henry Schein | Braided silk surgical suture, Ref#100-5000, M766750 | For mouse lung inflation |
| Twine | Staples | Cat#QUA-46173 | For rat lung inflation |
Riferimenti
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