Nós desenvolvemos um à base de colágeno<em> In vitro</em> Ensaio que promove a proliferação e invasão a partir de amostras de todos os subtipos de câncer de mama. Tomografia projeção óptica, uma técnica de microscopia tridimensional foi utilizado para visualizar e quantificar a expansão do tumor. Este ensaio poderá ser utilizada para quantificar a resposta à droga das amostras de tumor individual.
Câncer de mama é uma das principais causas de mortalidade no mundo ocidental. Está bem estabelecido que a propagação do câncer de mama, primeiro localmente e, mais tarde distalmente, é um fator importante no prognóstico do paciente. Sistemas experimentais de câncer de mama dependem de linhas de células normalmente derivadas de tumores primários ou derrame pleural. Dois grandes obstáculos dificultam esta pesquisa: (i) alguns conhecidos sub-tipos de cânceres de mama (principalmente pobres prognóstico tumores luminal B) não estão representados em colecções linha atual, (ii) a influência do microambiente do tumor geralmente não é tido em conta.
Nós demonstramos uma técnica para a cultura amostras de câncer de mama primário de todos os tipos de sub-. Isto é conseguido usando sistema tridimensional de cultura (3D) em que pequenos pedaços de tumor são incorporados no colágeno de ratos macio eu almofadas. Dentro de 2-3 semanas, as células cancerígenas se espalham para o colágeno e formam várias estruturas semelhantes aos observados em tumours1 humana. Adipócitos viável, células epiteliais e fibroblastos dentro do núcleo original eram evidentes na histologia. Células epiteliais malignas com morfologia squamoid foram demonstradas em invadir o colágeno circundante. Pleomorfismo nuclear era evidente dentro dessas células, juntamente com figuras de mitose e corpos apoptóticos.
Nós empregamos Tomografia projeção óptica (OPT), uma tecnologia de imagem 3D, a fim de quantificar o grau de disseminação do tumor em cultura. Temos usado OPT para medir o volume maior da cultura tumor, um parâmetro rotineiramente medidas durante o tratamento neo-adjuvante de pacientes com câncer de mama para avaliar a resposta à terapia medicamentosa.
Aqui, apresentamos uma oportunidade de tumores de mama humano sem cultura sub-tipo de preconceito e quantificar a propagação dos ex vivo. Este método poderia ser usado no futuro para quantificar a sensibilidade da droga no tumor original. Isso pode fornecer um modelo mais preditivo do que linhas celulares usados atualmente.
À base de colágeno ensaios para estudar o comportamento de linhagens de células de câncer são hoje amplamente utilizadas 6,7,8. No entanto, estas análises não têm refletido na complexidade do total do tumor e seu ambiente. Neste estudo, nós mostramos que materiais câncer de mama humano pode ser usado de uma maneira similar, ex vivo. Além disso, OPT é uma ferramenta útil para caracterizar a expansão 3D de câncer de mama. Descobrimos que a principal limitação desta técnica é a disponibilidade de materiais tumor (um único núcleo biópsia é suficiente para 4-6 ensaios). Outro fator limitante é que a invasão estrutural ocorre apenas em cerca de 40% dos ensaios. Para superar isso, nós regularmente adicionar qualquer tipo de tratamento desejado por volta do dia 7 para todos os ensaios com o crescimento visível.
O uso do OPT poderia ser estendido no futuro para também detectar alterações em massa, ex vivo, resultantes do tratamento da toxicodependência. Este por sua vez, poderia facilitar o tratamento do câncer mais individualizada, independente de modelos animais. Estamos a explorar a resposta de tumores ER + ao tamoxifeno ex vivo.
The authors have nothing to disclose.
Agradecemos a Lorna Renshaw (Edinburgh Breast Unit) para sua inestimável assistência na obtenção de amostras clínicas.
Uso de material tumoral foi aprovado pelo Comitê de Ética de Pesquisa Lothian (08/S1101/41) e obtido sob os auspícios do Centro Experimental Cancer Medicine programa (Edinburgh).
Este trabalho é apoiado pelo Conselho de Financiamento escocês. ADL é uma senhorita Margaret Butters Reekie companheiros Confiança clínico.
Name of Reagent | Company | Catalogue No. |
MEGM Complete | Lonza | CC-3150 |
DMEM/F12 | Sigma-Aldrich | D8900 10X1L |
β-oestradiol | Sigma-Aldrich | E8875-250MG |
Rabbit anti-cytokeratin | Dako | Z0622 |
Goat anti-rabbit Alexa555 | Invitrogen | A21422 |
All other standard reagents were obtained from Sigma-Aldrich.