ヒト多能性幹細胞(hPSCs)は、様々な疾患の無数を治療する可能性があります。これらの細胞のユーティリティは、身体内の任意の細胞型に分化することができるという事実にある。ここではhPSCsのpluripotenceを実証するために使用される奇形腫アッセイを、説明します。
多能性幹細胞(PSCの)彼らはすべての3つの胚葉由来の細胞に分化することができるユニークな特性を持っています。これは、それらのさまざまな疾患の治療のための潜在的に貴重なツールとなっています。ヒト胚性幹細胞(ヒトES細胞)の誘導多能性幹細胞(性IPSC)と継続的な研究の出現により、特定の細胞株は多能性であることを示すことができるアッセイの必要性がある。生殖系列伝達は、マウス胚性幹細胞(MESC)線1,2,3のpluripotenceを実証するためのゴールドスタンダードとされています。このアッセイを使用して、研究者は、MESCラインが生殖細胞4を含む胚内のすべての種類の細胞を作ることができることを示すことができる。ヒトESCが生殖系列伝達のためにテストすることはできませんので、人間のESC線5,6の生成では、これらの細胞のpluripotenceを証明するために適切なアッセイは不明であった。代理として、奇形腫アッセイは現在pluripotを実証するために使用されているヒト多能性幹細胞のency(hPSCs)7,8,9。このアッセイは最近、精査の下に来ており、新しい技術が積極的に検討されていますが、奇形腫アッセイは、現在のゴールドスタンダードは7です。このアッセイでは、問題の細胞は、免疫妥協マウスに注入される。細胞は多能性である場合、奇形腫は、最終的に開発し、腫瘍のセクションでは、全3胚葉10からの組織が 表示されます。奇形腫アッセイでは、hPSCsは、マウスのさまざまな領域に注入することができます。皮下又は筋肉内11のいずれか、または足に、最も一般的な注射部位は精巣カプセル、腎臓被膜、肝臓が含まれています。ここでは、腫瘍の成長のためのサイトとして精巣カプセルを使用してhPSCsから奇形腫を生成するための堅牢なプロトコルを記述します。
ここで紹介する方法は、精巣カプセルでhPSCsから奇形を発生させる信頼性の高い、簡単な手段を提供します。この手法では、いくつかの重要なパラメータがあります。特に、それはコントロールとして多能性であることが知られているhPSC細胞株を注入することが重要です。他の重要なパラメータは、注入し、腫瘍の観測の間の時間間隔が含まれています。 WA09のような細胞株では、奇形腫は6-8週間で観察されるべきである。新しいIPSCの行のために私たちはしばしば、10週間が必要とされることがわかります。もう一つの懸念は、注入された細胞の数です。我々は100万セルを挿入しますが、このアッセイは、簡単に少ない細胞で行うことができます。さらに、注入媒体は重要である。我々は、PBSまたはDMEM/F-12とは対照的に、細胞は、マトリゲルとDMEM/F-12の1:1混合物に注入されたとき我々は最良の結果を得ることがわかります。
The authors have nothing to disclose.
この作品は、CIRM助成金#TR-1250、RT1-01108、およびCL1-00502によって資金を供給された。
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Accutase | Invitrogen | A1110501 |
DMEM/F-12 | Invitrogen | 113300-032 |
Matrigel | BD Biosciences | 354277 |