قياس نشاط ناهض في مستقبلات البروتين يقترن G
Summary
وهناك طريقة لتقدير تقارب مستمر لناهض للدولة النشط (<em> K<sub> ب</sub</emيوصف>) لمستقبلات البروتين يقترن G. التحليل ينص على تدابير المطلقة أو النسبية<em> K<sub> ب</sub</em> اعتمادا على ما إذا التأسيسية تنشيط مستقبلات غير قابلة للقياس. أسلوبنا ينطبق على المصب استجابات مختلفة من التنشيط مستقبلة.
Abstract
عندما ناهض ينشط عدد سكانها مستقبلات البروتين يقترن G (GPCRs) ، فإنه يثير مسارا يشير إلى أن يتوج في استجابة الخلايا او الانسجة. ويمكن تحليل هذه العملية على مستوى واحد من مستقبلات ، بلغ عدد السكان المستقبلات ، أو استجابة المصب. هنا نحن تصف كيفية تحليل استجابة المتلقين للحصول على تقدير للتقارب ناهض المستمر للحالة نشطة من المستقبلات واحدة.
مستقبلات تتصرف كما أن تبديل كمي بالتناوب بين الدول النشطة وغير النشطة (الشكل 1). في حالة نشطة تتفاعل مع بروتينات معينة أو مجموعة الشركاء الآخرين في الإشارة. في غياب يغاندس ، وتسود حالة غير نشطة. الربط من ناهض يزيد من احتمال أن مستقبلات ستتحول الى حالة نشطة بسبب التقارب المستمر للحالة نشطة (K ب) هو أكبر بكثير من تلك التي للدولة غير نشطة (K أ). وخلاصة للالنواتج عشوائية من جميع المستقبلات في غلة السكان على مستوى ثابت من تفعيل مستقبلات في الوقت المناسب. والمتبادل للتركيز ناهض انتزاع نصف القصوى تنشيط مستقبلات تعادل ثابت لوحظ تقارب (K OBS) ، ويتم تعريف جزء من ناهض مستقبلات المجمعات في حالة نشطة وفعالية (ε) (الشكل 2).
وقد تم تطوير أساليب لتحليل استجابات المتلقين من GPCRs التي تمكن من تقدير K OBS والكفاءة النسبية ل1،2 ناهض. في هذا التقرير ، وتبين لنا كيفية تعديل هذا التحليل لتقدير القيمة النسبية ناهض ب K إلى أن من آخر ناهض. لفحوصات الذي يحمل النشاط التأسيسية ، وتبين لنا كيفية تقدير ب K في وحدات مطلقة من -1 م.
لدينا وسيلة لتحليل ناهض التركيز على الاستجابة منحنيات 3،4 يتكونمن الانحدار غير الخطية العالمية باستخدام نموذج تشغيلي 5. نحن تصف الإجراء باستخدام البرنامج التطبيقي ، بريزم (GraphPad برمجيات ، وشركة سان دييغو ، كاليفورنيا). تحليل الغلة تقديرا لنتاج K OBS ومعلمة تتناسب مع فعالية (τ). تقدير τK OBS واحد ناهض ، مقسوما على آخر ، هو قياس نسبي لب K (RA ط) 6. عن أي نشاط مستقبلات المعرض التأسيسي ، فمن الممكن لتقدير معلمة تتناسب مع فعالية مستقبلات معقدة الحرة (τ SYS). في هذه الحالة ، القيمة ب K من ناهض ما يعادل τK OBS / τ SYS 3.
لدينا وسيلة مفيدة لتحديد الانتقائية لمستقبلات ناهض لفرعية لقياس وناهض مستقبلات إشارات من خلال مجموعة من البروتينات المختلفة.
Protocol
Discussion
لأن لدينا وسيلة لتقدير RA ط (القيمة النسبية ب K) لا يتطلب سوى قياس منحنيات التركيز على الاستجابة ناهض ، يمكن القيام به في أي وقت تحليلنا تقاس هذه المنحنيات.
إذا يوما بعد يوم الاختلاف في الاستجابة لإعداد التجريبية (م?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح جنرال موتورز 69829.
Riferimenti
- Stephenson, R. P. A modification of receptor theory. British Journal of Pharmacology. 11, 379-393 (1956).
- Furchgott, R. F. The use of b-haloalkylamines in the differentiation of receptors and in the determination of dissociation constants of receptor-agonist complexes. Advances in Drug Research. 3, 21-55 (1966).
- Ehlert, F. J., Suga, H., Griffin, M. T. Analysis of agonism and inverse agonism in functional assays with constitutive activity: Estimation of orthosteric ligand affinity constants for active and inactive receptor states. J. Pharmacol. Exp. Ther. 33, 671-686 (2011).
- Griffin, M. T., Figueroa, K. W., Liller, S., Ehlert, F. J. Estimation of Agonist Activity at G Protein-Coupled Receptors: Analysis of M2 Muscarinic Receptor Signaling through Gi/o,Gs, and G15. J. Pharmacol. Exp. Ther. 321, 1193-1207 (2007).
- Black, J. W., Leff, P. Operational models of pharmacological agonism. Proceedings of the Royal Society of LondonSeries B: Biological Sciences. 220, 141-162 (1983).
- Tran, J. A., Chang, A., Matsui, M., Ehlert, F. J. Estimation of relative microscopic affinity constants of agonists for the active state of the receptor in functional studies on M2 and M3 muscarinic receptors. Mol. Pharmacol. 75, 381-396 (2009).
- Schultz, J., Hamprecht, B., Daly, J. W. Accumulation of adenosine 3′:5′-cyclic monophosphate in clonal glial cells: labeling of intracellular adenine nucleotides with radioactive adenine. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 69, 1266-1270 (1972).
- Berridge, M. J., Downes, C. P., Hanley, M. R. Lithium amplifies agonist-dependent phosphatidylinositol responses in brain and salivary glands. Biochemical Journal. 206, 587-595 (1982).
- Kendall, D. A., Hill, S. J. . Methods in Neurotransmitter Receptor Analysis. , 68-87 (1990).
- Pulido-Rios, M. Vitro Isolated Tissue Functional Muscarinic Receptor Assays. Current Protocols in Pharmacology. 48, 4-15 (2010).
- Kenakin, T., Enna, S. J. . Current Protocols in Pharmacology. , (2001).
- Ehlert, F. J., Griffin, M. T., Sawyer, G. W., Bailon, R. A. simple method for estimation of agonist activity at receptor subtypes: comparison of native and cloned M3 muscarinic receptors in guinea pig ileum and transfected cells. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 289, 981-992 (1999).
- Burstein, E. S., Spalding, T. A., Brann, M. R. Pharmacology of muscarinic receptor subtypes constitutively activated by G proteins. Mol. Pharmacol. 51, 312-319 (1997).
