Un protocollo per l'esecuzione unilaterale 6-OHDA lesioni del fascio proencefalo mediale è descritto nei topi. Questo metodo ha un basso tasso di mortalità (13,3%) con l'89% degli animali sopravvissuti mostrano una perdita> 95% della dopamina striatale e di 90,63 ± -4,02% pregiudizi ipsiversive rotazione verso il lato della lesione.
Il unilateralmente lesionata 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesionato modello murino della malattia di Parkinson (PD) si è rivelato prezioso per avanzare la nostra comprensione dei meccanismi alla base dei sintomi parkinsoniani, poiché essa ricapitola i cambiamenti nei circuiti dei gangli della base e farmacologia osservata in pazienti parkinsoniani 1-4. Tuttavia, le modifiche precise cellulari e molecolari che si verificano a cortico-striatali sinapsi delle vie di uscita all'interno del corpo striato, che è la zona di ingresso principale dei gangli basali rimanere sfuggente, e questo è ritenuto sito dove alterazioni patologiche sottostanti presentano sintomi parkinsoniani 3 , 5.
Nel PD, la comprensione dei meccanismi alla base di cambiamenti nella degenerazione dei gangli basali circuito seguente del nigro-striatale è stata notevolmente migliorata con lo sviluppo del cromosoma batterico artificiale (BAC) in topi che esprimono proteine fluorescenti verdi guidati da promuovere8, consentendo loro di essere valutati singolarmente:;: specifico per le due vie di uscita striatali (eGFP-D2 e eGFP-A2a via indiretta EGFP-D1 diretta via) rs. Ad esempio, studi recenti hanno suggerito che ci sono cambiamenti patologici nella plasticità sinaptica in topi parkinsoniani 9,10. Tuttavia, questi studi hanno utilizzato topi giovani e modelli acuti di parkinsonismo. Non è chiaro se le modifiche descritte in ratti adulti con stabili 6-OHDA lesioni si verificano anche in questi modelli. Altri gruppi hanno tentato di generare una stabile lesionato unilateralmente-6-OHDA modello di topo adulto del PD da parte la lesione del fascio mediale del proencefalo (MFB), purtroppo, il tasso di mortalità in questo studio è estremamente elevata, con solo il 14% sopravvive l'intervento chirurgico per il 21 11 giorni o più. Studi più recenti hanno generato intra-nigral lesioni sia con un tasso di mortalità bassa perdita> 80% dei neuroni dopaminergici, ma espressione di L-DOPA discinesia indotta da 11,12,13,14 era variabilein questi studi. Un altro modello di topo ben definito del PD è l'MPTP-leso il mouse 15. Anche se questo modello si è dimostrato utile nella valutazione dei potenziali agenti neuroprotettivi 16, è meno adatto per la comprensione dei meccanismi alla base dei sintomi del morbo di Parkinson, in quanto questo modello spesso non riesce a indurre deficit motori, e mostra una grande variabilità nella misura di lesione 17, 18 .
Qui abbiamo sviluppato una stabile unilaterale 6-OHDA lesionato modello murino di PD mediante somministrazione diretta di 6-OHDA nella MFB, che causa la perdita costante> 95% della dopamina striatale (come misurato mediante HPLC), oltre a produrre il comportamento squilibri osservati nel ben caratterizzati unilaterale 6-OHDA-lesionato modello di ratto PD. Questo modello murino di recente sviluppo del PD si rivelerà un prezioso strumento per la comprensione dei meccanismi alla base della generazione dei sintomi parkinsoniani.
Questo protocollo descrive un metodo per la generazione di uno stabile unilaterale 6-OHDA lesionato modello murino della malattia di Parkinson, che è estremamente riproducibile, con un'elevata percentuale di successo lesione, e un tasso di mortalità basso. Il successo di 6-OHDA chirurgia lesione può essere facilmente stimata misurando spontaneo comportamento a rotazione con rotazioni ipsiversive> 70 sulla indicativi di> deplezione dopamina 95% in lesionato striato 27. Quantificazione dei livelli …
The authors have nothing to disclose.
Questo lavoro è stato sostenuto dal Ministero degli Affari Esteri e del Commercio internazionale (Governo del Canada), University of Toronto Connaught Fondo, la Fondazione canadese per l'innovazione, NSERC, la Fondazione Krembil and Trust di Parkinson Cure.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
desipramine HCl | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | D125 | 25mg/kg |
pargyline HCl | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | P8013 | 5mg/kg |
6-OHDA HBr | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | H116 | 3mg / mouse |
stereotaxic Frame | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 900 | |
mouse ear cups | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 921 Zygoma Ear Cups | |
mouse incisor bar | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 923B | |
mouse anaesthesia mask | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 923B | |
priming kit (containing 250ml syringe) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | PRMKIT 81120 | |
RN compression fitting kit (1 mm) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55750-01 | |
PEEK tubing from RN compression fitting kit< (1/16th inch) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55751-01 | |
dual small hub RN Coupler | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55752-01 | |
luer to small hub RN adaptor | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55753-01 | |
1ml 25S syringe model 7001KH | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 80100 | |
*33G removable needle (RN) pack of 6. . Custom 1 inch with 45<° bevel | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 7803-05 | |
Scissors | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada. | 14084-08 | |
Scalpel | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 10003-12 | |
Scalpel blades | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 10035-20 | |
Forcep | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 11608-15 | |
Hemostats | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada. | 13004-14 | |
Isoflurane | Abbot | 02241315 | 2-3% |
Suters (Vicryl 4.0) | Syneture | SS-683 | |
Steriliser | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 18000-45 | |
Infusion Pump | Harvard Apparatus | PhD 22/2000 | |
Needles (27G) | Becton Dickinson | 305109 | |
Needles (25G) | Becton Dickinson | 305127 | |
Syringes (1ml) | BD syringe | 309692 | |
Anaesthesia trolley | LEI medical | M2000 | |
Baytril | CDMV, St. hyacinthe, QC | 102207 | |
Lidocaine | CDMV, St. hyacinthe, QC | 3914 | |
Betadine solution | CDMV, St. hyacinthe, QC | 19955 |