Um protocolo para a realização unilaterais 6-OHDA lesões do feixe prosencéfalo medial em ratinhos é descrito. Este método tem uma baixa taxa de mortalidade (13,3%) com 89% dos animais sobreviventes mostrando> perda de 95% da dopamina do estriado e 90,63 ± -4,02% viés ipsiversive rotacional para o lado da lesão.
O unilateralmente lesados 6 hyroxydopamine-(6-OHDA)-lesionado modelo do rato da doença de Parkinson (DP) provou ser inestimável para avançar na compreensão dos mecanismos subjacentes a sintomas parkinsonianos, uma vez que ele recapitula as mudanças no circuito gânglios da base e farmacologia observada em pacientes parkinsonianos 1-4. No entanto, as alterações celulares e moleculares precisos que ocorrem em cortico-estriatais sinapses das vias de saída dentro do estriado, que é a região de entrada principal dos gânglios da base permanecem ainda desconhecidos, e este é acreditado para ser local onde as anormalidades patológicas subjacentes sintomas parkinsonianos surgir 3 , 5.
Na DP, compreendendo os mecanismos subjacentes alterações na degeneração dos gânglios basais circuito seguinte da via nigro-estriatal tem sido grandemente avançado pelo desenvolvimento do cromossoma artificial bacteriano (BAC) ratinhos sobre-expressam proteínas fluorescentes verdes conduzidos por promoverrs específico para as duas vias de saída do estriado (via direta: EGFP-D1; via indireta: eGFP-D2 e eGFP-A2a) 8, permitindo-lhes a ser estudado isoladamente. Por exemplo, estudos recentes sugeriram que há mudanças patológicas em plasticidade sináptica em ratinhos parkinsonianos 9,10. No entanto, estes estudos utilizaram ratos juvenis e modelos agudos de parkinsonismo. Não é claro se as alterações descritas em ratos adultos com estáveis 6-OHDA lesões também ocorrem nestes modelos. Outros grupos têm tentado gerar um estável unilateralmente, lesionado 6-OHDA modelo do rato adulto de DP por lesão do feixe medial do prosencéfalo (MFB), infelizmente, a taxa de mortalidade neste estudo foi extremamente elevada, com apenas 14% de sobreviver à cirurgia para o dia 21 dias ou mais 11. Estudos mais recentes têm gerado intra-nigral lesões tanto com taxa de mortalidade mais baixo> perda de 80% dos neurônios dopaminérgicos, no entanto expressão de L-DOPA discinesia induzida 11,12,13,14 foi variávelnestes estudos. Outro modelo de mouse bem estabelecida de PD é o mouse MPTP lesada 15. Embora este modelo tem se mostrado útil na avaliação de potenciais agentes neuroprotetores 16, é menos adequado para a compreensão dos mecanismos subjacentes sintomas da DP, já que este modelo muitas vezes não consegue induzir déficits motores, e mostra uma grande variabilidade na extensão da lesão 17, 18 .
Aqui temos desenvolvido um modelo de rato estável unilateral 6-OHDA lesionada de PD por administração directa de 6-OHDA na MFB, que faz com que consistentemente> perda de 95% da dopamina do estriado (como medido por HPLC), bem como a produção do comportamental desequilíbrios observado no modelo de rato bem caracterizado unilateral 6-OHDA lesionada de PD. Este modelo de camundongo recém-desenvolvida da PD será uma ferramenta valiosa para a compreensão dos mecanismos subjacentes à geração dos sintomas parkinsonianos.
Este protocolo descreve um método para a geração de um modelo de rato estável unilateral 6-OHDA lesionada da doença de Parkinson, que é extremamente reprodutíveis, com uma elevada taxa lesão sucesso, e uma baixa taxa de mortalidade. O sucesso de 6-OHDA cirurgia lesão pode ser facilmente estimada pela medição do comportamento rotacional espontânea com> rotações ipsiversive 70% indicativos de> depleção de dopamina 95% no striatum lesionada 27. Quantificação dos níveis de dopamina do est…
The authors have nothing to disclose.
Este trabalho foi financiado pelo Departamento de Assuntos Exteriores e Comércio Internacional (Governo do Canadá), Universidade de Toronto Connaught Fund, a Fundação Canadense para Inovação, NSERC, a Fundação Krembil e Confiança do Cure Parkinson.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
desipramine HCl | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | D125 | 25mg/kg |
pargyline HCl | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | P8013 | 5mg/kg |
6-OHDA HBr | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | H116 | 3mg / mouse |
stereotaxic Frame | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 900 | |
mouse ear cups | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 921 Zygoma Ear Cups | |
mouse incisor bar | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 923B | |
mouse anaesthesia mask | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 923B | |
priming kit (containing 250ml syringe) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | PRMKIT 81120 | |
RN compression fitting kit (1 mm) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55750-01 | |
PEEK tubing from RN compression fitting kit< (1/16th inch) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55751-01 | |
dual small hub RN Coupler | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55752-01 | |
luer to small hub RN adaptor | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55753-01 | |
1ml 25S syringe model 7001KH | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 80100 | |
*33G removable needle (RN) pack of 6. . Custom 1 inch with 45<° bevel | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 7803-05 | |
Scissors | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada. | 14084-08 | |
Scalpel | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 10003-12 | |
Scalpel blades | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 10035-20 | |
Forcep | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 11608-15 | |
Hemostats | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada. | 13004-14 | |
Isoflurane | Abbot | 02241315 | 2-3% |
Suters (Vicryl 4.0) | Syneture | SS-683 | |
Steriliser | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 18000-45 | |
Infusion Pump | Harvard Apparatus | PhD 22/2000 | |
Needles (27G) | Becton Dickinson | 305109 | |
Needles (25G) | Becton Dickinson | 305127 | |
Syringes (1ml) | BD syringe | 309692 | |
Anaesthesia trolley | LEI medical | M2000 | |
Baytril | CDMV, St. hyacinthe, QC | 102207 | |
Lidocaine | CDMV, St. hyacinthe, QC | 3914 | |
Betadine solution | CDMV, St. hyacinthe, QC | 19955 |