نحن لشرح كيفية انشاء<em> في المختبر</em> نقص التروية / ضخه النموذجية وكيفية تقييم تأثير العلاج بالخلايا الجذعية على خلايا القلب تال للإقفار.
بروتوكولات زرع الخلايا الجذعية تجد طريقها إلى الممارسة السريرية 1،2،3. الحصول على أفضل النتائج ، مما يجعل من البروتوكولات أكثر قوة ، وإيجاد مصادر جديدة للخلايا زرع هي محور الأبحاث الحديثة 4،5. التحقيق في فعالية العلاج بالخلايا ليست مهمة سهلة وهناك حاجة إلى أدوات جديدة للتحقيق في الآليات التي تشارك في عملية المعالجة 6. صممنا على بروتوكول التجريبي لنقص التروية / ضخه من أجل السماح للمراقبة الاتصالات الخلوية وآليات التحت خلوية حتى أثناء نقص التروية / ضخه الاصابة وبعد زرع الخلايا الجذعية ، وتقييم مدى فعالية العلاج بالخلايا. ووضعت الخلايا cardiomyoblast H9c2 على لوحات ثقافة الخلية 7،8. وكان نقص التروية محاكاة مع 150 دقيقة في المتوسط الجلوكوز الحرة مع مستوى الاوكسجين أقل من 0.5 ٪. ثم ، أعيد إحياء وسائل الاعلام العادية ومستويات الأكسجين إلى محاكاة ضخه. بعد الحرمان من الأوكسجين الجلوكوز ،تم علاج الخلايا التالفة مع زرع النخاع العظمي المسمى حقوق الإنسان مستمد الخلايا الجذعية الوسيطة عن طريق إضافتها إلى الثقافة. ويفضل الخلايا الجذعية الوسيطة في التجارب السريرية لأنها متاحة بسهولة مع الحد الأدنى من الجراحة ، يمكن أن تتوسع بسهولة وذاتي. بعد 24 ساعة من زراعة المشتركة ، تم صبغ الخلايا مع calcein وإيثيديوم homodimer إلى التفريق بين الخلايا الحية والميتة. يسمح لنا هذا الإعداد للتحقيق في الاتصالات بين الخلايا باستخدام المجهر الفلورسنت مبائر ولقياس معدل البقاء على قيد الحياة من خلايا تال للإقفار بواسطة التدفق الخلوي. وأظهر الفحص المجهري مبائر التفاعلات بين السكان الخلية اثنين من الممثلين والانصهار وتشكيل خلية من الأنابيب النانومترية بين الخلايا. وكشف تحليل التدفق الخلوي 3 مجموعات من الخلايا التالفة والتي يمكن رسم على رسم بياني وتحليلها إحصائيا. ويمكن تحقيق هذه التجمعات السكانية بشكل منفصل والاستنتاجات التي يمكن استخلاصها من هذه البيانات على فعالية محاكاةالعلاجية النهج.
البروتوكول هو أظهر في النهج المختبر لقضية أكثر تعقيدا بكثير من العلاج بالخلايا الجذعية في عضلة القلب احتشاء ، مع مزايا وعيوب كل نموذج من هذا القبيل. من الواضح أنه لا يمكن تعكس المعقدة (المناعية مثلا) الأحداث التي تجري خلال احتشاء عضلة القلب ، وبعد ولكن يمكن التركيز عل…
The authors have nothing to disclose.
وأيد هذا العمل من قبل OTKA (المجرية صندوق البحث العلمي) D45933 ، T049621 ، تيت (المجرية للعلوم والتكنولوجيا) A4/04 ، Arg-17/2006 والخطيئة ، بولياي ، والزمالات Öveges TÁMOP 4.2.2-08 / 1 / KMR – 2008 – 0004 و4.2.1 / B 09/1/KMR-2010-0001. OTKA 83803. نود أن نشكر Gesztes وليام لتوفير الصوت عبر.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
calcein-AM | Molecular Probes | L3224, C3099 | http://www.invitrogen.com |
ethidium homodimer-2 | Molecular Probes | L3224, E3599 | http://www.invitrogen.com |
Vybrant DiD | Molecular Probes | V22887 | http://www.invitrogen.com |
Table 1. Reagents.
Name of the equipment | Company | Comments (optional) |
PeCon cell incubation system for Zeiss microscopes | PeCon GmbH | www.pecon.biz/ |
Table 2. Equipment.