גזע השתלת תאים ב במבחנה דגם סימולציה איסכמיה / reperfusion
Summary
אנו מדגימים כיצד להקים<em> במבחנה</em> איסכמיה / reperfusion מודל כיצד להעריך את ההשפעה של טיפול בתאי גזע לתאי לב על postischemic.
Abstract
השתלת תא גזע פרוטוקולים מוצאים את דרכם לתוך הפרקטיקה הקלינית 1,2,3. קבלת תוצאות טובות יותר, מה שהופך את הפרוטוקולים חזקים יותר, ולמצוא מקורות חדשים עבור תאים להשתלה הם מוקד של מחקר שנעשה לאחרונה 4,5. בחינת היעילות של טיפולים בתא אינה משימה קלה, כלים חדשים נדרשים כדי לחקור את המנגנונים המעורבים בתהליך הטיפול 6. תכננו פרוטוקול הניסוי של איסכמיה / reperfusion כדי לאפשר תצפית של חיבורי הסלולר מנגנוני subcellular גם במהלך הפציעה איסכמיה / reperfusion ואחרי השתלת תא גזע כדי להעריך את היעילות של טיפול בתא. H9c2 תאים cardiomyoblast הונחו על תרבות צלחות התא 7,8. איסכמיה היה מדומה עם 150 דקות בתווך גלוקוז חופשי עם רמת חמצן מתחת 0.5%. ואז, מדיה נורמלי רמות החמצן היו מחדש כדי לדמות reperfusion. לאחר שלילת חמצן גלוקוז,התאים שנפגעו טופלו השתלה של מח עצמות אדם נגזר תווית בתאי גזע mesenchymal ידי הוספתם התרבות. בתאי גזע mesenchymal עדיפים בניסויים קליניים משום שהם נגישים בקלות עם ניתוח פולשני מינימלי, ניתן להרחבה בקלות עצמיים. לאחר 24 שעות של עיבוד משותף, התאים היו מוכתמות calcein ו-ethidium homodimer להבדיל בין תאים חיים ומתים. התקנה זו מאפשרת לנו לחקור את הקשרים אינטר באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי confocal ו לכמת את שיעור ההישרדות של תאים postischemic ידי cytometry הזרימה. מיקרוסקופיה Confocal הראה את יחסי הגומלין של שתי אוכלוסיות תאים כגון איחוי תאים היווצרות של צינורות אינטר. Cytometry ניתוח תזרים חשף 3 אשכולות של תאים פגומים אשר ניתן להתוות על הגרף ונותחו סטטיסטית. אוכלוסיות אלה יכולים להיחקר בנפרד ניתן להסיק על נתונים אלה על האפקטיביות של סימולציהtherapeutical גישה.
Protocol
Discussion
פרוטוקול הפגינו הוא בגישה חוץ גופית לנושא הרבה יותר מורכב של טיפול בתאי גזע של אוטם שריר הלב, עם כל היתרונות והחסרונות של מודל כזה. ברור שזה לא יכול לשקף את מורכבות (למשל, מערכת החיסון) האירועים המתרחשים במהלך ואחרי האוטם בשריר הלב, אך ניתן למקד את ההשפעות הישירות של תא…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי OTKA (קרן הונגרית למחקר מדעי) D45933, T049621, ט (הונגריה מדע וטכנולוגיה קרן) A4/04, Arg-17/2006 ו SIN, Bolyai, מלגות Öveges ו TÁMOP 4.2.2-08 / 1 / KMR-2008-0004 ו – 4.2.1 / B 09/1/KMR-2010-0001. OTKA 83803. ברצוננו להודות Gesztes ויליאם למתן את הקריינות.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| calcein-AM | Molecular Probes | L3224, C3099 | http://www.invitrogen.com |
| ethidium homodimer-2 | Molecular Probes | L3224, E3599 | http://www.invitrogen.com |
| Vybrant DiD | Molecular Probes | V22887 | http://www.invitrogen.com |
Table 1. Reagents.
| Name of the equipment | Company | Comments (optional) |
| PeCon cell incubation system for Zeiss microscopes | PeCon GmbH | www.pecon.biz/ |
Table 2. Equipment.
Riferimenti
- Dimmeler, S., Burchfield, J., Zeiher, A. M. Cell-Based Therapy of Myocardial Infarction. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, (2008).
- Kim, S. U., de Vellis, J. Stem cell-based cell therapy in neurological diseases: A review. Journal of Neuroscience Research. 87, 2183-21 (2009).
- Lee, K., Chan, C. K., Patil, N., Goodman, S. B. Cell therapy for bone regeneration-Bench to bedside. Journal of Biomedical Materials Research Part B: Applied Biomaterials. 89, 252-25 (2009).
- Gaipa, G. GMP-based CD133+ cells isolation maintains progenitor angiogenic properties and enhances standardization in cardiovascular cell therapy. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 14, 1619-1619 (2010).
- Trounson, A. New perspectives in human stem cell therapeutic research. BMC medicine. 7, 29-29 (2009).
- Mazhari, R., Hare, J. M. Mechanisms of action of mesenchymal stem cells in cardiac repair: potential influences on the cardiac stem cell niche. Nat Clin Pract Cardiovasc Med. 4, S21-S21 (2007).
- Kimes, B. W., Brandt, B. L. Properties of a clonal muscle cell line from rat heart. Experimental Cell Research. 98, 367-367 (1976).
- Sardao, V. A. Vital imaging of H9c2 myoblasts exposed to tert-butylhydroperoxide–characterization of morphological features of cell death. BMC Cell Biol. 8, 11-11 (2007).
- Hescheler, J. Morphological, biochemical, and electrophysiological characterization of a clonal cell (H9c2) line from rat heart. Circulation research. 69, 1476-1476 (1991).
- Cselenyak, A. Mesenchymal stem cells rescue cardiomyoblasts from cell death in an in vitro ischemia model via direct cell-to-cell connections. BMC Cell Biol. 11, 29-29 (2010).
- Sauvant, C. Implementation of an in vitro model system for investigation of reperfusion damage after renal ischemia. Cell Physiol Biochem. 24, 567-567 (2009).
- Namas, R. A. Hypoxia-Induced Overexpression of BNIP3 is Not Dependent on Hypoxia-Inducible Factor 1alpha in Mouse Hepatocytes. Shock. 36, 196-196 (2011).
- Cao, L. Hypoxia/Reoxygenation Up-Regulated the Expression of Death Receptor 5 and Enhanced Apoptosis in Human Hepatocyte Line. Transplantation Proceedings. 38, 2207-2207 (2006).
- Meloni, B. P., Meade, A. J., Kitikomolsuk, D., Knuckey, N. W. Characterisation of neuronal cell death in acute and delayed in vitro ischemia (oxygen-glucose deprivation) models. Journal of Neuroscience Methods. 195, 67-67 (2011).
- Mimeault, M., Hauke, R., Batra, S. K. Stem cells: a revolution in therapeutics–recent advances in stem cell biology and their therapeutic applications in regenerative medicine and cancer therapies. Clinical Pharmacology & Therapeutics. 82, 252-252 (2007).
- Angoulvant, D. Mesenchymal stem cell conditioned media attenuates in vitro and ex vivo myocardial reperfusion injury. J Heart Lung Transplant. 30, 95-95 (2010).
- Lim, Y. J., Zheng, S., Zuo, Z. Morphine Preconditions Purkinje Cells against Cell Death under In Vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Conditions. Anesthesiology. 100, 562-562 (2004).
- Guo, J. Estrogen-receptor-mediated protection of cerebral endothelial cell viability and mitochondrial function after ischemic insult in vitro. J Cereb Blood Flow Metab. 30, 545-545 (2010).
