에서 간세포 이식 체외에서 시뮬레이션 국소 빈혈 / Reperfusion 모델
Summary
우리는을 설정하는 방법을 보여줍니다<em> 체외에서</em> 국소 빈혈 / reperfusion 모델과 방법을 postischemic 심장 세포에서 줄기 세포 치료의 효과를 평가할 수 있습니다.
Abstract
줄기 세포 이식 프로토콜은 임상 연습 1,2,3에 그들의 방법을 찾는 수 있습니다. 더 나은 결과를 얻기 프로토콜보다 강력한 만들기, implantable 세포에 대한 새로운 소스를 찾는 것이 4,5 최근 연구의 초점입니다. 세포 요법의 효과를 조사하는 것은 쉬운 일이 아니므로 새로운 도구는 치료 과정 6 관련된 메커니즘을 조사하기 위해 필요합니다. 우리는 국소 빈혈 / reperfusion 상해시와 줄기 세포 이식 후 휴대폰 연결 심지어 subcellular 구조의 관찰을 허용하고 세포 요법의 효능을 평가하기 위해 국소 빈혈 / reperfusion의 실험 프로토콜을 설계했습니다. H9c2 cardiomyoblast 세포는 세포 배양 접시 7,8에 배치했다. 국소 빈혈은 0.5 % 이하의 산소 수준 포도당 무료 매체 150 분 모의했다. 그렇다면 정상적인 미디어와 산소 수준은 reperfusion을 시뮬레이트하기 위해 reintroduced되었습니다. 산소 포도당 박탈 후,손상된 세포는 문화에 그들을 추가하여 mesenchymal 줄기 세포를 파생 표시된 인간 골수의 이식과 함께 치료를했다. 그들이 최소한의 침략 수술 쉽게 쉽게 확장하고 autologous되기 때문에 Mesenchymal 줄기 세포는 임상 실험에서 원하는 있습니다. 공동 배양 24 시간 후 세포가 살고 죽은 세포를 구분하는 calcein하고 ethidium – homodimer로 얼룩진했다. 이 설정은 우리가 공촛점 형광 현미경을 사용하여 세포 연결을 조사하고 유동세포계측법에 의해 postischemic 세포의 생존 비율을 정할 수있었습니다. 공촛점 현미경은 세포 융합과 세포 나노튜브의 형성과 같은 두 가지 세포 집단의 상호 작용을 보여주었다. 유동세포계측법 분석 그래프를 꾸몄다 그리고 통계적으로 분석할 수 손상된 세포의 3 클러스터를 공개했다. 이러한 집단은 별도로 조사하고 결론은 시뮬레이션의 효과에 이러한 데이터를 발행한 수치료 접근.
Protocol
Discussion
시연 프로토콜은 같은 모델의 모든 장점과 단점과 심근 경색에 줄기 세포 치료의 훨씬 더 복잡한 문제 체외 접근 방식에있다. 분명히 그것은 심근 경색 동안 후 일어나는 복잡한 (예 : 면역) 이벤트를 반영하지 수 있지만 postischemic 세포에 대한 추가 세포의 직접적인 효과에 초점을 맞출 수 있습니다. H9c2 cardiomyoblasts에 대한 시뮬레이션 국소 빈혈의 효과는 매우 사용되는 세포의 통과 번호와 O 2<…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 OTKA (헝가리어 과학 연구 기금) D45933, T049621, TÉT (헝가리어 과학 재단) A4/04, Arg-17/2006과 죄, Bolyai, Öveges의 장학금과 TÁMOP 지원했습니다 4.2.2-08 / 1 / KMR – 2008-0004 및 4.2.1 / B 09/1/KMR-2010-0001. OTKA 83803. 우리는 오버 음성을 제공하는 윌리엄 Gesztes 감사하고 싶습니다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| calcein-AM | Molecular Probes | L3224, C3099 | http://www.invitrogen.com |
| ethidium homodimer-2 | Molecular Probes | L3224, E3599 | http://www.invitrogen.com |
| Vybrant DiD | Molecular Probes | V22887 | http://www.invitrogen.com |
Table 1. Reagents.
| Name of the equipment | Company | Comments (optional) |
| PeCon cell incubation system for Zeiss microscopes | PeCon GmbH | www.pecon.biz/ |
Table 2. Equipment.
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