Мы демонстрируем, как настроить<em> В пробирке</em> Ишемии / реперфузии модель и как оценить эффект от терапии стволовыми клетками на постишемического сердечных клеток.
Стволовые протоколов трансплантации клеток находят свой путь в клиническую практику 1,2,3. Получение лучших результатов, делая протоколы более надежной, и найти новые источники для имплантируемых клетки находятся в центре внимания недавнего исследования 4,5. Исследование эффективности клеточной терапии является не простой задачей и новые инструменты необходимы для исследования механизмов, вовлеченных в процесс лечения 6. Мы разработали экспериментальный протокол ишемии / реперфузии, чтобы позволить наблюдение сотовой связи и даже субклеточные механизмы при ишемии / реперфузии и после трансплантации стволовых клеток и оценить эффективность клеточной терапии. H9c2 клетки cardiomyoblast были размещены на культуре клеток пластины 7,8. Ишемия был смоделирован с 150 минут в глюкозу среде без кислорода ниже уровня 0,5%. Затем, нормальные средства массовой информации и уровень кислорода вновь были введены, чтобы имитировать реперфузии. После кислородное голодание глюкозы,поврежденные клетки обрабатывали трансплантации меченых костного мозга человека производных мезенхимальных стволовых клеток, добавив их в культуру. Мезенхимальные стволовые клетки являются предпочтительными в клинических испытаниях, потому что они легко доступны с минимальной инвазивной хирургии, легко расширяемой и аутологичных. После 24 часов совместного культивирования клетки были окрашены кальцеин и этидий-гомодимера провести различие между живыми и мертвыми клетками. Эта установка позволяет исследовать межклеточных соединений с помощью конфокальной флуоресцентной микроскопии и количественно выживаемость постишемического клетки с помощью проточной цитометрии. Конфокальной микроскопии показали, взаимодействия двух клеточных популяций, таких как слияние клеток и формирование межклеточного нанотрубок. Анализ проточной цитометрии выявлено 3 скопления поврежденных клеток, которые могут быть нанесены на график и статистическому анализу. Эти группы населения могут быть исследованы отдельно и выводы можно сделать из этих данных об эффективности моделируемыхтерапевтический подход.
Продемонстрировала протокол в пробирке подход к гораздо более сложный вопрос о стволовых клеток при инфаркте миокарда, при всех преимуществах и недостатках такой модели. Очевидно, она не может отражать комплекс (например, иммунологические) события, происходящие во время и после инфар?…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана OTKA (венгерский научный фонд исследований) D45933, T049621, ТЕТ (венгерский научно-технический фонд) A4/04, Arg-17/2006 и SIN, Бойяи, Öveges Стипендии и TÁMOP 4.2.2-08 / 1 / KMR-2008-0004 и 4.2.1 / B 09/1/KMR-2010-0001. OTKA 83803. Мы хотели бы поблагодарить Уильяма Gesztes за предоставление голос за кадром.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
calcein-AM | Molecular Probes | L3224, C3099 | http://www.invitrogen.com |
ethidium homodimer-2 | Molecular Probes | L3224, E3599 | http://www.invitrogen.com |
Vybrant DiD | Molecular Probes | V22887 | http://www.invitrogen.com |
Table 1. Reagents.
Name of the equipment | Company | Comments (optional) |
PeCon cell incubation system for Zeiss microscopes | PeCon GmbH | www.pecon.biz/ |
Table 2. Equipment.