Uma técnica simplificada para<em> In situ</em> Excisão de Córnea e evisceração de tecido da retina do globo ocular humano

Summary

O artigo descreve uma técnica simplificada de córnea especiais de consumo e eviscerar os tecidos da retina do globo ocular de humanos doadores cadavéricos. A técnica descrita aqui vai ajudar a impostos especiais de consumo tecidos de boa qualidade para ser utilizados para transplantação, cirúrgicos ou de pesquisa, sem danificar outros tecidos do globo ocular.

Abstract

Enucleação é o processo de recuperação do globo ocular de um dador de cadáver deixando o resto do globo não perturbada. Excisão refere-se à recuperação de tecidos oculares, especialmente córnea, cortando-a separada a partir do globo ocular. Evisceração é o processo de remoção dos órgãos internos referidos aqui como retina. O globo ocular consiste na córnea, a esclerótica, o corpo vítreo, a lente, a íris, a retina, a coróide, etc músculos (Suppl. Figura 1). Quando um paciente está a sofrer de lesões da córnea, a córnea precisa de ser removido e um saudável deve ser transplantado por cirurgias keratoplastic. Doenças genéticas ou defeitos na função da retina pode comprometer a visão. Globos oculares humanos pode ser utilizado para vários procedimentos cirúrgicos, tais como bancos olho, o transplante da córnea humana ou esclerótica e investigação sobre os tecidos oculares. No entanto, há pouca informação disponível sobre a excisão da córnea e da retina humana, provavelmente devido ao lacessibilidade imited para os tecidos humanos. A maioria dos estudos que descrevem procedimentos semelhantes são realizados em modelos animais. Os cientistas da pesquisa depende da disponibilidade de tecidos oculares devidamente dissecadas e bem conservada, a fim de ampliar o conhecimento sobre a homeostase humana olho, desenvolvimento e função. Como recebemos grande quantidade de globos oculares, dos quais aproximadamente 40% (Tabela 1) deles são usados ​​para fins de pesquisa, somos capazes de realizar grande quantidade de experiências sobre esses tecidos, definindo técnicas para consumo e preservá-los regularmente.

A córnea é um tecido avascular, que permite a transmissão de luz na retina e para este propósito deve sempre manter um bom grau de transparência. Dentro da córnea, a região limbo, que é um reservatório das células estaminais, ajuda a reconstrução de células epiteliais e restringe o crescimento excessivo da conjuntiva manter a transparência da córnea e de clareza. O tamanho e th ickness da córnea são críticos para a visão clara, como alterações em qualquer um deles pode levar a distraído visão, claro. A córnea compreende de 5 camadas, a) epitélio, b) camada de Bowman, c) estroma, d) membrana de Descemet ee) endotélio. Todas as camadas devem funcionar corretamente para garantir uma visão clara ^4,5,6. A coróide é a túnica intermédia entre a esclerótica e da retina, delimitada no interior pela membrana de Bruch e é responsável para o fluxo de sangue no olho. A coróide também ajuda a regular a alimentação de temperatura e material para as camadas exteriores da retina ^5,6. A retina é uma camada de tecido nervoso, que cobre a parte de trás do globo ocular (Suppl. Figura 1) e consiste de duas partes: uma parte fotorreceptor e uma parte não receptivo. A retina ajuda para receber a luz a partir da córnea e do cristalino e converte-os em a energia química, eventualmente, transmitido para o cérebro, com a ajuda do nervo óptico ^5,6.

ove_content "> O objetivo deste trabalho é fornecer um protocolo para a dissecção dos tecidos da córnea e da retina de globos oculares humanos. Evitar a contaminação cruzada com tecidos adjacentes e preservando a integridade do RNA é de fundamental importância como esses tecidos são indispensáveis ​​para fins de pesquisa voltadas em (i) caracterizar o transcriptoma dos tecidos oculares, (ii) o isolamento de células-tronco para projetos de medicina regenerativa, e (iii) avaliar diferenças histológicas entre os tecidos normais de / afetados assuntos. Neste artigo descrevemos a técnica que usamos atualmente para remover a córnea, a coróide e tecidos da retina de um globo ocular. Aqui nós fornecemos um protocolo detalhado para a dissecção do globo ocular humano ea excisão dos tecidos da córnea e da retina. O vídeo que o acompanha vai ajudar os pesquisadores a aprender uma técnica adequada para a recuperação de preciosos tecidos humanos que são difíceis de encontrar regularmente.

Protocol

1. Na excisão in situ da córnea de globos oculares Ligue o câmara de fluxo laminar de ar de aproximadamente 15 minutos antes da utilização. Limpar a câmara de fluxo laminar usando 70% de álcool isopropílico. Coloque roupas de proteção pessoal, como touca cirúrgica e máscara. Esfregue as mãos e os antebraços e secar com uma toalha estéril. Usar luvas estéreis e vestido de mangas ou usando uma técnica asséptica. Configure o campo estéril, colocando uma bandeja inst…

Discussion

Tanto a excisão, correta e boa conservação dos tecidos da córnea e da retina são críticos como defeitos menores, tais como lesão endotelial ou elevado número de dobras de Descemet pode levar à falência do enxerto da córnea enquanto que alterações de temperatura ou manuseio incorreto pode comprometer a integridade dos tecidos da retina. O objetivo deste trabalho é mostrar como os tecidos da córnea e da retina pode ser isolado da melhor maneira, sem induzir danos ou alterações que possam comprometer sua u…

Materials

Materials for excision of cornea and retina.

Product description	Dimensions	Company / Institute
Guarded disposable scalpel	Blade size 15	Swann-Morton
Sterile bandages	5 cm X 5 cm, 8 layered, 5 pcs	Artsana
Sterile disposable medical towel	35 X 50 cm	U.Jet
Sterile scissors	Blades 24 mm / overall length. 95 mm curved, blunt	e.janach
Sterile forceps	Stainless steel -100 mm 11 X 2 ruled by 0.70 mm teeth	e.janach
Corneal claw – Disposable medical device		NIIOS (Hippocratech)
	Preparations
PBS	100 ml PBS [10x] in 900 ml d/w (distilled water)	Sigma-Aldrich
Na-thiosulphate	1 gm Na-thiosulphate in 1 litre of PBS [1x]	Sigma-Aldrich
I-PVP	5 gm I-PVP in 1 litre d/w	Sigma-Aldrich

Table 2. The table describes the materials used for excision of cornea and retina and the company they are received from.

Materials for storage medium (2000 ml).

Components	Supplier	Catalogue number	Concentration	Quantity
MEM (1X) liquid	Invitrogen	32360-034		1900 ml
Sodium pyruvate	Invitrogen	11360-039	1mM (10ml/l)	20 ml
L-glutamine	Invitrogen	25030-032	2mM (10ml/l)	20 ml
Antibiotic/antimycotic	Sigma-aldrich	A5955-20ML	10ml/l	20 ml
Newborn calf serum	Invitrogen	26010-74	2% (20 ml/l)	40 ml

Table 3. Materials for storage medium.

Preparation of storage medium

Add all the ingredients using the specific concentrations as given above in a jar and mix well. Filter them using pore size of 0.2 micron filter (Millipore, Milan, Italy) with help of a peristaltic pump. Preserve the medium in the bottles at RT.

Materials for transport medium (2000 ml).

Components	Supplier	Catalogue number	Concentration	Quantity
MEM (1X) liquid	Invitrogen	32360-034		1800 ml
Sodium pyruvate	Invitrogen	11360-039	1mM (10 ml/l)	20ml
L-glutamine	Invitrogen	25030-032	2mM (10 ml/l)	20ml
Newborn calf serum	Invitrogen	26010-74	2% (20 ml/l)	40 ml
Dextran t500	Pharmacosmos	551005004007	6% (60 gm/litre)	120 g/l

Table 4. Material for transport medium.

Preparation of transport medium

Add Dextran 6% in ~ 1.5 litre of MEM and leave it overnight. Add the rest of ingredients in the media and filter using 0.2 micron filter (Millipore, Milan, Italy) using a vacuum pump. Preserve the medium in the bottles at RT.