카르복시 Fluorescein Succinimidyl 에스터 (CFSE)를 사용 인간 Glioblastoma의 속도가 느린 - 나누면 전지의 식별 및 분리
Summary
이 비디오 프로토콜은 세포 분열의 주파수에 따라 인간 glioblastoma의 셀의 다른 하위 집단의 식별 및 분리를위한 형광 염료 carboxyfluorescein succinimidyl 에스테르 (CFSE)의 응용 프로그램을 보여줍니다.
Abstract
종양 이질성은 종양 견고성을 지원하는 기본 기능을 나타냅니다 및 치료 전략 1의 발전에 중심 장애물를 제공합니다. 종양 이질성의 문제를 극복하려면, 특정 질병 pathologies을 유도하고 임상 적으로 관련성이 높은 목표를 대표하는 종양 subpopulations의 phenotypic (에피네프린) 유전 및 기능 식별 및 특성을 사용 assays과 도구를 개발하는 것이 필수적입니다. 그것은 지금은 잘 종양이 느린 자전거가되는 기능 기준을 적극적으로 종양이 형성 뇌, 유방, 피부를 포함한 여러 암의 능력과 연결되어 세포 분열의 다른 주파수로 세포의 하위 분수 독특한 전시입니다, 그리고 설립 췌장뿐만 아니라 백혈병 2-8. 형광 염료 carboxyfluorescein succinimidyl 에스테르 (CFSE)이 혈액 관련 t의 체외에서 세포의 분열 주파수를 추적하고 생체에 사용되었습니다umors 및 glioblastoma 2,7,8 등의 고체 종양. CFSE의 세포 permeant 비 형광 프로 약물은 안정적인 아미드 결합 할 구를 형성하는 세포 아민 그룹과의 succinimidyl 잔기의 반응을 통해 단백질 covalently 구속력이 세포 내에서 유지되는 형광 화합물로 세포 esterases으로 변환됩니다. 형광 염료가 아침마다 세포 분열과 형광 강도의 반턱로 이어지는, 부서에 따라 딸 세포 사이에 분포되어있다. 이 부문 10 8-10 발까지 세포주기 주파수를 추적 할 수 있습니다. CFSE 유지 용량은 암 줄기 세포 활동 2 풍부 할 보여준 속도가 느린 자전거 subpopulation을 (위 5퍼센트 염료 유지 세포)를 식별하고 격리하는 뇌 종양 세포와 함께 사용되었습니다.
이 프로토콜은 인간 glio의 문화에서 CFSE로 세포를 얼룩의 기술과 개인 인구의 격리를 설명blastoma (GBM) – 파생 유동 세포 계측법 2를 사용 서로 다른 부문 가격을 가진 세포. 기술은 식별하고 CFSE 라벨을 유지하는 능력을 가진 세포의 뇌 종양이 천천히 자전거 인구를 분리하기 위해 제공하고 있습니다.
Protocol
Discussion
연구의 증가는 종양 형성과 치료 저항 2-8에 기여하는 암의 세포의 느린 나누어 하위 칸의 중요성을 보여주고 있습니다. 따라서 서로 다른 성장 속도로 subpopulations을 비교하는 것이 더 일반적으로 세포 또는 특정 subpopulation의 연구를 가능하게 실험 방법을 설명하고 표준화하는 것이 중요합니다. 세포 분열 자신의 속도에 따라 세포의 하위 분수를 식별하고 분리 할 수 CFSE를 사용하면 ?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 뇌 종양 연구, 뇌 종양 치료 및 건강의 국립 연구소 (1R21CA141020-01)의 프레스턴 A. 웰스 주니어 센터 플로리다 센터에 의해 지원되었다.
Materials
| Name of the reagent | Tipo | Company | Catalogue number |
| NeuroCult NSC Basal Medium (Human) | Medium | Stem Cell Technologies | 05750 |
| NeuroCult NSC Proliferation Supplements (Human) | Medium supplement | Stem Cell Technologies | 05753 |
| %0.05 trypsin-EDTA | Reagent | Gibco | 25300-062 |
| Soybean trypsin inhibitor | Reagent | Sigma | T6522 |
| Penicillin/Streptomycin | Reagent | Gibco | 15140-122 |
| T25 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 136196 |
| T80 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 178905 |
| 15 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352096 |
| 50 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352070 |
| EGF | Growth factor | R&D | 2028-EG |
| CellTrace CFSE Cell Proliferation Kit | Fluorescent Cell Division Tracking Dye | Molecular Probes, Invitrogen | C34554 |
Riferimenti
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