Geração de linfócitos T de tronco pluripotentes induzidas (iPS) células dá uma abordagem alternativa de utilização de células-tronco embrionárias para T imunoterapia baseada em células. O método mostra que, utilizando quer<em> In vitro</em> Ou<em> In vivo</em> Sistema de indução, as células iPS são capazes de se diferenciar em linfócitos T convencionais e antigénio-específica.
Transferência adoptiva de células (ACT) de linfócitos-antigénio específico CD8 + T citotóxicos (CTLs) é um promissor no tratamento de uma variedade de doenças malignas 1. CTLs podem reconhecer as células malignas, interagindo antigénios tumorais com os receptores de células T (TCR), e citotoxinas de libertação, bem como as citocinas para matar as células malignas. Sabe-se que menos diferenciadas e central-memória (denominado como altamente reactivo) CTLs são a população óptima para ACT-baseado em imunoterapia, porque estes CTLs têm um elevado potencial proliferativo, são menos propensas a apoptose de células mais diferenciadas e têm uma maior capacidade de responder às citocinas homeostáticos 2-7. No entanto, devido a dificuldades na obtenção de um elevado número de CTLs tais partir de pacientes, há uma necessidade urgente de encontrar uma nova abordagem para gerar altamente reactivos Ag-CTLs específicos para o êxito ACT-terapias baseadas.
TCR transdução do caule auto-renovávelAs células para a reconstituição imunológica tem um potencial terapêutico para o tratamento de doenças 8-10. No entanto, a abordagem para obter células-tronco embrionárias (CES) de pacientes não é viável. Embora a utilização de células estaminais hematopoiéticas (HSCs) para fins terapêuticos tem sido amplamente aplicada na clínica 11-13, HSCs ter reduzido a diferenciação e capacidades proliferativas, e HSCs são difíceis de expandir-se em cultura de células in vitro 14-16. Tecnologia de célula iPS recente eo desenvolvimento de um sistema in vitro para a entrega do gene são capazes de gerar células iPS de pacientes sem qualquer abordagem cirúrgica. Além disso, como os CES, as células iPS possuem capacidade proliferativa indefinido in vitro, e têm sido mostrados para se diferenciarem em células hematopoiéticas. Assim, as células iPS têm um maior potencial para ser usado em ACT-baseado em imunoterapia em comparação com os CES ou HSCs.
Aqui, nós apresentamos métodos para a geração de linfócito Tcitos de iPS células di vitro, e em programação in vivo de antigénios específicos de CTLs de iPS células para promover a vigilância do cancro imune. Estimulação in vitro com um ligando Notch impulsiona a diferenciação das células T a partir de células iPS, e os resultados de genes de TCR de transdução em células iPS diferenciar em específicas de antigénio de células T in vivo, o que impede o crescimento do tumor. Assim, demonstramos antigénio-específica diferenciação de células T a partir de células iPS. Os nossos estudos proporcionam uma abordagem potencialmente mais eficiente para a geração de antigénio-CTLs específicos para o ACT terapias baseadas e facilitar o desenvolvimento de estratégias terapêuticas para doenças.
Para ACT-terapias baseadas, o em geração in vitro de um grande número de altamente reactivos Ag-específicos de células T in vivo para re-infusão é uma abordagem ideal. Embora o nosso método in vitro dá origem de células T funcionais a partir de células iPS, um grande número de iPS células derivadas de células morrem em quatro semanas, especialmente na quarta semana. Concluímos que os sinais de sobrevivência a partir do entalhe de sinalização mediada pelo DL1, b…
The authors have nothing to disclose.
Agradecemos ao Dr. Shinya Yamanaka (Universidade de Kyoto) para a prestação de iPS-MEF-Ng-20D-17 linha celular, Dr. Dario Vignali (Hospital St. Jude Children Research) para apoiar a OT1-2A • pMig II construção, Dr. Juan Carlos Zuniga-Pflucker (Departamento de Imunologia da Universidade de Toronto) para apoiar a linha celular OP9-DL1, e Dr. Kent E Vrana (Departamento de Farmacologia, da Universidade Penn State College of Medicine) para ajudar o projeto deste estudo. Este projecto é financiado, em bolsas com o número de Grant K18CA151798 do Instituto Nacional do Câncer, o Trust Barsumian eo Melanoma Research Foundation (Song J.).
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
C57BL/6J mice | Jackson Laboratory | 000664 |
B6.129S7-Rag1tm1Mom/J | Jackson Laboratory | 002216 |
Anti-CD3 (2C11) antibody | BD PharMingen | 553058 |
Anti-CD28 (37.51) antibody | BD PharMingen | 553295 |
Anti-CD3 (17A2) antibody | BioLegend | 100202 |
Anti-CD4 (GK1.5) antibody | BioLegend | 100417 |
Anti-CD8 (53-6.7) antibody | BioLegend | 100714 |
Anti-CD25 (3C7) antibody | BioLegend | 101912 |
Anti-CD44 (1M7) antibody | BioLegend | 103012 |
Anti-CD117 (2B8) antibody | BioLegend | 105812 |
Anti-TCR-β (H57597) antibody | BioLegend | 109220 |
Anti-IL-2 (JES6-5H4) antibody | BioLegend | 503810 |
Anti-IFN-γ (XMG1.2) antibody | BioLegend | 505822 |
DMEM | Invitrogen | ABCD1234 |
α-MEM | Invitrogen | A10490-01 |
FBS | HyClone | SH3007.01 |
Brefeldin A | Sigma | B7651 |
Polybrene | Sigma | 107689 |
GeneJammer | Integrated Sciences | 204130 |
RNA kit | Qiagen | 74104 |
DNA kit | Qiagen | 69504 |
CD8 Isolation Kit | Miltenyi Biotec | 130-095-236 |
ACK lysis buffer | Lonza | 10-548E |
mFlt-3L | PeproTech | 250-31L |
mIL-7 | PeproTech | 217-17 |
Gelatin | Sigma | G9391 |
FITC-anti-OVA antibody | Rockland Immunochemicals | 200-4233 |
Permeabilization buffer | Biolegend | 421002 |
BSA | Sigma | A7906 |
Formaldehyde | Sigma | F8775 |
0.4 μm filter | MIllipore | |
Moflo Cell Sorter | Dake Cytomation | |
Calibur Flow Cytometer | BD | |
LSR II Flow Cytometer | BD | |
Mouse restrainer | Braintree Scientific |