Grauer Star ist die häufigste Ursache für Erblindung in der Welt. Ultraviolette Strahlung der Sonne (UV) ist der Hauptrisikofaktor für die Katarakt-Entwicklung. Ein Tiermodell von weit UVR-B induzierte Katarakt entwickelt. In diesem Artikel beschreiben wir Methoden für die Untersuchung der Entstehung von grauem Star: Exposition gegenüber UV-Strahlung, quantitative RT-PCR und Immunhistochemie.
Grauer Star ist die häufigste Ursache für Erblindung in der Welt ein. Die Weltgesundheitsorganisation definiert Katarakt als einer Trübung der Linse des Auges, die die Übertragung von Licht behindert. Grauer Star ist eine multifaktorielle Erkrankung mit Diabetes, Rauchen, UV-Strahlung (UVR), Alkohol, ionisierende Strahlung, Steroide und Hypertonie. Es gibt starke experimentelle 2-4 und epidemiologische Evidenz 5,6, dass UVR Katarakt verursacht. Wir entwickelten ein Tiermodell für UVR B induzierten Katarakt sowohl betäubt 7 und nicht-narkotisierten Tieren 8.
Das einzige Heilmittel für die Katarakt-Chirurgie ist aber diese Behandlung ist nicht für alle zugänglich. Es wurde geschätzt, dass eine Verzögerung des Einsetzens von Katarakt für 10 Jahre könnte die Notwendigkeit für die Kataraktchirurgie um 50% 9 zu reduzieren. Um das Auftreten von Katarakt verzögern, ist es notwendig, die Mechanismen der Entstehung von grauem Star zu verstehen und wirksame Prävention Strategiegien. Unter den Verfahren zur Kataraktentwicklung spielt Apoptose eine wichtige Rolle bei Einleitung von Katarakt bei Menschen und Tieren 10. Wir konzentrieren uns wurde kürzlich Apoptose in der Linse als Mechanismus zum Kataraktentwicklung 8,11,12. Es wird erwartet, dass ein besseres Verständnis der Wirkung von UV-Strahlung auf der Apoptoseweg werden Möglichkeiten für die Entdeckung neuer Arzneimittel zu verhindern Katarakt liefern.
In diesem Artikel beschreiben wir, wie Katarakt kann experimentell durch in vivo Exposition gegenüber UVR-B induziert. Weitere RT-PCR und Immunhistochemie dargestellt als Werkzeuge zur molekularen Mechanismen von UVR-B induzierte Katarakt studieren.
Dieses Papier beschreibt Methoden, die Untersuchung der molekularen Ereignisse, die während UVR-B induzierte Katarakt ermöglichen.
In Anbetracht, dass die meisten Informationen für in vivo UVR induzierten Katarakt aus Experimenten an Albino-Sprague-Dawley-Ratten 7, 16, 17, 18, 19 abgeleitet wurde, beschlossen wir, die Albino-Sprague-Dawley-Ratte in der aktuellen Studie zu verwenden. Alter der Ratten betrug sechs Wochen alte. Das Geschlecht wurde gewählt, w…
The authors have nothing to disclose.
S och Drottning Viktorias Frimurarstiftelse: Diese Arbeit wurde von der Karolinska Institutet KID-Finanzierung, Swedish Radiation Protection Authority, Karolinska Institutet Eye Research Foundation, Gun och Bertil Stohnes Stiftelse, St. Eriks Eye Hospital Research Foundation, Ögonfonden, Konung Gustav V unterstützt.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Ketalar | Pfizer | 150086 | 50 mg/ml |
Rompun | Bayer | 022545 | 20 mg/ml |
Oculentum Simplex | Apoteket, Sweden | 336164 | 5 g |
Mydriacyl | Alcon | 00352 | 10 mg/ml |
Balanced salt solution | Alcon | 0007950055 | |
3.5 ul β-mercaptoethanol | |||
NucleoSpin RNA II total RNA isolation kit | Macherey-Nagel GmbH&Co, Duren, Germany | 740955.50 | |
p53 DNA specific primers | biomers.net GmbH | Custom made | |
Taq DNA polymerase, dNTPack | Roche | 04 728 866 001 | |
Agarose | Sigma | A5093 | |
Ethidium bromide solution 0.5 mg/ml | Sigma | E1385 | |
Nano-Drop ND-1000 spectrophotometer | NanoDrop Products | ||
1st Strand cDNA synthesis kit for RT-PCR (AMV) | Roche Diagnostics GmbH | 11 483 188 001 | |
iCycler MyiQ Single Color Real Time PCR detection system | Bio-Rad Laboratories | ||
96-well plate | Sarstedt | 72.1979.202 | |
TaqMan Gene Expression Master Mix | Applied Biosystems | 4369016 | |
TaqMan Gene Expression Assay for caspase 3 | Applied Biosystems | Rn00563902_m1 | |
TaqMan Gene Expression Assay for 18s | Applied Biosystems | Hs99999901_s1 | |
MyiQ software | Bio-Rad Laboratories | ||
Cleaved caspase-3 (Asp175) | Cell signaling technology | 9661 | |
Anti rabbit IgG | Abcam | Ab6798 | |
Sucrose | Sigma Aldrich | 84097 | |
Vectashield | Vector Laboratories | ||
Universal Microscope Axioplan 2 Imaging | Carl Zeiss | ||
Paraformaldehyde | Sigma Aldrich | 441244 | |
TBE buffer 10x | Promega | V4251 |