Summary
Denne videoen viser en disseksjon prosedyre for behandling av human pancreas i flere lagringsformater. Anatomisk orientering opprettholdes gjennom hele bukspyttkjertelen regionene å tillate definisjon av regional holme sammensetning og tetthet.
Abstract
Dette disseksjon og prøvetaking ble utviklet for Nettverk for Bukspyttkjertelen organdonorer med Diabetes (nPOD) program for å standardisere utarbeidelsen av bukspyttkjertelen utvinnes fra avdød organdonorer. Bukspyttkjertelen er delt inn i 3 hovedområder (hode, kropp, hale) etterfulgt av serielle tverrgående seksjoner hele mediale til laterale akse. Vekslende seksjoner brukes til fast parafin og friske frosne blokker og gjenværende prøvene er hakket for snap frosne prøven preparater, enten med eller uten RNase hemmere, for DNA, RNA, eller protein isolasjon. Det overordnede målet i bukspyttkjertelen disseksjon prosedyren er å prøve hele bukspyttkjertelen samtidig opprettholde anatomisk orientering.
Endokrine celle heterogenitet i form av holmen sammensetning, størrelse, og tall rapporteres for menneskelige holmer i forhold til gnager holmer 1. Flertallet av menneskelige holmer fra bukspyttkjertelen hodet, blir kroppen og halen regionene består av insulin-containing beta-cellene etterfulgt av lavere andeler av glukagon som inneholder alfa-celler og somatostatin-inneholder Í-celler. Pankreas polypeptid-holdige PP celler og ghrelin-holdige Epsilon celler er også tilstede, men i lite antall. I kontrast, inneholder uncinate regionen holmer som primært består av pankreas polypeptid-holdige PP celler 2. Disse regionale holmen variasjoner oppstår fra utviklingsmessige forskjeller. Bukspyttkjertelen utvikler seg fra den ventrale og dorsale bukspyttkjertelen knopper i forutgående og etter rotasjon av magesekken og tolvfingertarmen, den ventrale lobe trekk og sikringer med dorsal tre. Den ventrale lapp danner den bakre delen av hodet inkludert uncinate prosessen mens dorsal lapp gir opphav til resten av orgelet. Regional bukspyttkjertelen variasjon er også rapportert ved halen regionen har høyere holme tetthet sammenlignet med andre regioner og dorsal lobe-deriverte komponenter gjennomgår selektiv atrofi i type 1 diabetes <sopp> 4,5.
Andre organer og vev er ofte utvinnes fra organdonorer og omfatter bukspyttkjertelen lymfeknuter, milt og ikke-bukspyttkjertelen lymfeknuter. Disse prøvene er gjenvunnet med lignende formater som for bukspyttkjertelen med tillegg av isolering av cryopreserved celler. Når proksimale duodenum er inkludert med bukspyttkjertelen, kan duodenal mucosa samles for parafin og frossen blokk og hakket snap frosne preparater.
Protocol
Discussion
Målet med denne prosedyren er å definere en standard bukspyttkjertelen behandling som kan være harmonisert på tvers av flere innsamlingssteder og dermed tillate sammenligninger av resultater oppnådd av forskjellige grupper. Den disseksjon Metoden er basert på standard kirurgiske patologi praksis med flere trinn for annotering av store bukspyttkjertel regioner etterfulgt av intra-regionale underavdelinger. Standardisering av biospecimen bearbeidingsmetoder kreves for å lette innsamling av høy kvalitet prøver eks…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Forfatterne takker givernes familiene og orgelet innkjøpsorganisasjoner involvert i denne forskningen og Maria Martino og Irina Kusmartseva for sin eksperthjelp. Dette arbeidet ble finansiert av Juvenile Diabetes Research Foundation (MC-T., MA) i støtte av Nettverk for Bukspyttkjertelen organdonorer med diabetes.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Dissection instruments including scalpels with 22 blades | Various | Various | |
| Centrifuge tubes (15 and 50 ml) | Fisher Scientific | 05-539-5, 430828 | Sterile |
| Cryotubes(1.8 ml) | VWR North America | 89004-300 | Sterile, bar codes optional |
| RNAlater | Ambion | AM7021 | |
| Surgical Pathology Ink | |||
| Cassettes | Mercedes Medical | CAS ECO109 | |
| 10% Neutral Buffered Formalin | Fisher Scientific | 23-245-685 | |
| OCT Freezing Media | TissueTek | 4583 | |
| Molds | ThermoScientific | 58952 | Various sizes |
| Isopentane | Fisher Scientific | O3551-4 | OCT chilling bath |
| Dry ice | OCT chilling bath | ||
| Liquid nitrogen in Dewar flask | Snap freezing cryovials | ||
| Cell culture dish (100mm) | Corning | 430167 | Sterile |
| Hyclone DMEF | ThermoScientific | SH30023.01 | Sterile, store refrigerated, glutamine included |
| Fetal Bovine Serum | Cellgro | 35-010-CV | Sterile, store frozen aliquots |
| Penicillin/Streptomycin/Antifungal | GIBCO | 15240-062 | Sterile, store frozen aliquots |
| Type 9 Paraffin | Richard-Allan Scientific | 8337 | |
| 1X D-PBS | GIBCO | 14190-144 | Sterile |
| 16% Paraformaldehyde | EM Sciences | 15710 | Make fresh, store refrigerated |
| 8% Glutaraldehyde | EM Sciences | 16019 | Make fresh, store refrigerated |
| Biosafety Level 2 hood | Various | ||
| Ultra-low freezer | Various | ||
| Sakura Cassette Printer | Sakura | ||
| Sakura VIP300 | Sakura | Automatic paraffin processor | |
| Paraffin Embedding Station | ThermoFisher |
Table 1. Specific reagents and equipment.
Riferimenti
- Brissova, M. Assessment of human pancreatic islet architecture and composition by laser scanning confocal microscopy. J. Histochem. Cytochem. 53, 1087-1097 (2005).
- Rahier, J. The pancreatic polypeptide cells in the human pancreas: the effects of age and diabetes. J. Clin. Endocrinol. Metab. 56, 441-444 (1983).
- Uchida, T., Takada, T., Ammori, B. J., Suda, K., Takahashi, T. Three-dimensional reconstruction of the ventral and dorsal pancreas: a new insight into anatomy and embryonic development. J. Hepatobiliary Pancreat. Surg. 6, 176-180 (1999).
- Wittingen, J., Frey, C. F. Islet concentration in the head, body, tail and uncinate process of the pancreas. Ann. Surg. 179, 412-414 (1974).
- Rahier, J., Goebbels, R., Henquin, J. Cellular composition of the human diabetic pancreas. Diabetologia. 24, 366-371 (1983).
- Vaught, J. An NCI perspective on creating sustainable biospecimen resources. J. Natl. Cancer Inst. Monogr. 42, 1-7 (2011).
- Gianani, R. Initial results of screening of nondiabetic organ donors for expression of islet autoantibodies. J. Clin. Endocrinol. Metab. 91, 1855-1861 (2006).
- Tauriainen, S., Salmela, K., Rantala, I., Knip, M., Hyöty, H. Collecting high-quality pancreatic tissue for experimental study from organ donors with signs of β-cell autoimmunity. Diabetes Metab. Res. Rev. 26, 585-592 (2010).
- In’t Veld, P. Screening for insulitis in adult autoantibody-positive organ donors. Diabetes. 56, 2400-2404 (2007).
- Töns, H. A., Terpstra, O. T., Bouwman, E. Heterogeneity of human pancreata in perspective of the isolation of the islets of langerhans. Transplant Proc. 40, 367-369 (2008).
