종양 세포 침략에 중간 유체 흐름의 효과를 측정하는 세 가지 차원 세포 배양 모델
Summary
침입형 유체의 흐름은 고체 종양에서 상승되며 종양 세포 침공을 조절하실 수 있습니다. 여기에서 우리는 매트릭스에 포함된 세포에 침입형 유체 흐름을 적용한 다음 세포 침입에 미치는 영향을 측정할 수있는 기법을 설명합니다. 이 기술은 쉽게 다른 시스템을 연구하는 데 적용할 수 있습니다.
Abstract
대부분의 고체 종양의 성장과 진보는 암 세포와 기질 – 연관된 종양 microenvironment 1에서 신호에 대한 그들의 반응의 초기 변화에 따라 달라집니다. 이전에는 종양 microenvironment에 관한 연구는 주로 종양 – stromal 상호 작용 1-2에 주력하고있다. 그러나, 종양 microenvironment도 효과 저조한 이해 남아 biophysical 세력, 다양한 포함되어 있습니다. 이들 세력은 유전자 발현의 변화, 세포 분열, 분화 및 침공 3로 이어질 종양 성장의 biomechanical 결과입니다. 매트릭스 밀도 4, 강성 5-6, 6-7 및 구조, 중간 유체 압력 8, 침입형 유체의 흐름 8 모든 암 진행하는 동안 변경됩니다.
특히 침입형 유체의 흐름은 정상 조직의 8-10에 비해 종양으로 높다. 예상 침입형 유체 층오우 판매율은 측정 및 종양 크기와 차별화 9, 11에 따라 0.1-3 μm의들 -1의 범위에 있어야 발견되었다. 이것은 종양 유발 angiogenesis 및 증가된 혈관 투과성 12 시까지 인한 고가 중간 유체 압력에 의한 것입니다. 침입형 유체의 흐름은 암세포 13-14, 혈관 섬유아 세포 및 평활근 세포 15 침략을 향상을 보여줘왔다. 이 침공은 3-D 16 셀 주위 만들거나 모체 metalloproteinase (MMP) 표현 15, 케모카인 분비와 세포 유착 분자 발현 17 증가 autologous chemotactic의 그라디언트가 원인일 수 있습니다. 그러나 세포가 유체의 흐름을 감지하는 메커니즘이 잘 이해되지 않습니다. 종양 세포의 행동을 변화 이외에도, 중간 유체 흐름은 종양 microenvironment의 다른 세포의 활동을 modulates. 이것은 종양 – 홍보 myofibr으로 섬유아 세포의 (A) 운전 분화와 관련된oblasts 18 (b)는 항원과 림프절 19, 그리고 (c) modulating 림프 내피 세포 morphogenesis 20 ~ 다른 용해 요인에 호송.
여기에 제시된 기술은 체외에서 세포에 침입형 유체 흐름을 부과하고 침공 (그림 1)에 미치는 영향을 quantifies. 이 방법은 stromal 및 암 세포 침입 13-15, 17 일에 유체 흐름의 효과를 측정하기 위해 여러 연구에 게시되었습니다. 매트릭스 구성, 셀 유형, 및 세포 농도를 변경하면이 방법은 이러한 침략, 분화, 증식 및 유전자 발현 등의 세포 프로세스에 침입형 흐름의 효과를 연구하기 위해 다른 질환과 생리적 시스템에 적용할 수 있습니다.
Protocol
Discussion
여기에서 우리는 세포 배양 삽입 내에 3 차원 매트릭스에 포함된 세포를 이용하여 종양 세포 침공에 침입형 흐름의 효과를 quantifying위한 방법론을 설명했습니다. 이것과 유사한 방식이 세포 유형에 13-15, 17의 다양한 침입형 흐름의 효과를 연구하는 데 사용되었습니다. 우리의 접근 방식은 일부 유형을 사용하여 종양의 매트릭스 microenvironment을 모방한 것이었 나 상피 조직과 주변 기질 …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Collagen (Rat Tail) | BD | 354236 | Keep sterile |
| Millicell cell culture insert | Millipore | PI8P01250 | 8 μm pore diameter, polycarbonate membrane |
| Matrigel | BD | 354234 | Keep sterile |
| PBS | Sigma Aldrich | 100M-8202 | 10x for preparing gel solution, 1x for washing steps |
| Sodium Hydroxide, 1.0N Solution | Sigma Aldrich | S2770 | Keep sterile |
| DMEM 1X | CellGro | 10-013-CV | Keep sterile |
| Fetal Bovine Serum | Atlanta Biologicals | 511150 | Keep sterile |
| Penicillin Streptomycin | CellGro | 30002CI | Keep sterile |
| Triton X-100 | Sigma Aldrich | X100-500 ml | 0.5% in PBS |
| Paraformaldehyde | Fisher Scientific | 04042-500 | 4% in PBS |
| Deionized Water | Keep sterile | ||
| 4′,6-diaminido-2-phenylindole (DAPI) | MP Biomedicals | 0215757401 | 1 mg/ml stock solution |
| Mounting Solution | Thermo Scientific | TA-030-FM | |
| Trypsin-EDTA | CellGro | 25-052-CI | Keep sterile |
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