파킨슨 병 분야에서 Mitochondrial Phenotypes을 모니터링하기위한 기본 인간 섬유 아세포의 사용
Summary
파킨슨 병을 일으키는 유전자에 변이를 가지고 환자의 섬유 아세포가 쉽게 접근 할 수를 나타냅니다<em> 예 생체</em질병 관련 phenotypes을 공부하기> 모델입니다. 라이브 셀 이미징은 살아있는 세포에서 형태학 및 기능 매개 변수를 연구 할 수있는 기회를 제공합니다. 여기 인간 섬유 아세포와 mitochondrial phenotypes의 후속 모니터링의 준비에 대해 설명합니다.
Abstract
파킨슨 병 (PD)는 두 번째 가장 일반적인 운동 장애입니다 60 1 세 이상 사람들의 1 %를 영향을 미칩니다. 노화의 가장 중요한 위험 인자이기 때문에, PD의 경우는 다음 수십 년이 동안 증가 할 것이다. 병적 인 단백질 폴딩과 장애인 단백질 열화 경로 옆에 mitochondrial 기능과 형태의 변경은 PD 3-11의 neurodegeneration의 추가 특징으로 지적되었다.
Parkinsonism의 분자 경로를 해부하는 체외 모델에서와 같이 손쥐과 인간의 암 세포의 연구의 년 후에, 전직 생체 모델로 환자와 적절한 컨트롤에서 인간 섬유 아세포의 사용은 잠재적 인 경고로 간주하는 경우, 가치있는 연구 도구가되었습니다. 불후 아니라 인공 세포 모델보다 다른 질병 관련 변이를 들고 환자에서 주요 섬유 아세포는 분명히 중요한 병적 인 기능 O를 반영F 인간의 질병.
여기, 피부 biopsies을 복용 배양 인간 섬유 아세포 및 mitochondrial phenotypes을 정의하기 위해 필수적인 현미경 기술에 대한 상세한 프로토콜을 사용하는 절차를 윤곽을 그리다. 이는 mitochondrial 기능과 역학 관련이있는 PD와 관련된 다양한 기능을 조사하는 데 사용되었습니다. 예 생체가 미토콘드리아는 lysosomal 경로를 통해 자신의 기능, 형태, 리소좀 (세포 소기관 굴욕 역기능 미토콘드리아)과 저하 colocalization의 관점에서 분석 될 수 . 이 phenotypes는 PD의 조기 징후의 식별을위한 관련성이 높은 인간의 질병 유전자 캐리어의 임상 모터 증상을 앞에 할 수 있습니다. 따라서 여기에 제시된 assays는 neurodegeneration의 병적 인 기능을 파악하고 PD의 새로운 치료 전략을 정의하는 데 도움이 중요한 도구로 활용 될 수있다.
Protocol
Discussion
예 생체 모델과 같은 환자 피부 섬유 아세포는 질병 관련 유전자 결함을 특징하는 중요한 도구를 나타냅니다. 또한, 피부 파생 섬유 아세포가 쉽게 접근 할 수 있으며, 배양에 확장 할 수 있습니다. 그들은 내생 질병을 일으키는 유전자 있지만, 영향을받는 개인의 전체 유전자 배경뿐만 아니라이 포함되어 그러므로, PD-관련 유전자 변이를 들고 환자에서 얻은 주요 세포는 종양 세포 라인의 ?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 프리츠 티센 (Thyssen) 재단 (RK에 10.11.2.153), 독일 연구 협회 (DFG, KR2119/3-2 및 RK에 KR2119/8-1), 교육 연방 교육부 및 연구 (BMBF에서 보조금에 의해 지원되었다 , NGFNplus, RK에 01GS08134)과 [LFB로] 자선 Hertie 재단의 박사 장학금으로. 우리는 비디오 촬영시의 지원 캐롤라인 Obermaier와 줄리아 Westermeier 감사드립니다.
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue no. |
| Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 medium | Invitrogen | 52400-025 |
| RPMI 1640 medium, no Phenol Red | Invitrogen | 11835-063 |
| Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline (DPBS) | Invitrogen | 14190-094 |
| Fibroblast growth factor 2 (FGF2) | PeproTech | 100-18B |
| AccuMax (detachment solution) | PAA | L11-008 |
| Lab-TekTMII chambered coverglasses | Nalge Nunc International | 115382 |
| Tetramethylrodamine ethyl ester (TMRE) | Invitrogen | T-669 |
| Mitotracker Green FM | Invitrogen | M-7514 |
| Mitotracker CM-H2XRos | Invitrogen | M-7513 |
| Lyostracker Red DND-99 | Invitrogen | L-7528 |
| Hoechst 33342 | Invitrogen | H-3570 |
Table 1. Specific reagents and equipment.
Riferimenti
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