Parkinson hastalığı yol açan genlerde mutasyon taşıyan hastaların Fibroblastlar kolay erişilebilir bir temsil<em> Ex vivo</emHastalığı ile ilişkili fenotipleri incelemek için> modeli. Canlı hücre görüntüleme yaşayan hücrelerin morfolojik ve fonksiyonel parametreleri çalışma fırsatı verir. Burada insan fibroblastlar ve mitokondriyal fenotipleri sonraki izleme hazırlanması tarif.
Parkinson hastalığı (PH) en sık görülen ikinci hareket bozukluğudur ve 60 1 yaşın üzerindeki insanların% 1 etkiler. Yaşlanma en önemli risk faktörü olduğundan, PD vakaları önümüzdeki yıllarda 2 sırasında artacaktır. Patolojik protein katlanması ve yetersiz protein parçalanma yolları yanında, mitokondriyal fonksiyon ve morfolojisi değişiklikler PD 3-11 nörodejenerasyon daha ayırt edici niteliği olarak işaret edilmiştir.
Parkinsonizm moleküler yolaklar incelemek için in vitro modellerde olduğu gibi fare ve insan kanser hücrelerinde araştırma yıl sonra, ex vivo modelleri olarak hasta ve uygun kontrollerin insan fibroblastlar kullanım potansiyeli uyarılar olarak kabul edilir ise, değerli bir araştırma aracı haline gelmiştir. Ölümsüzleştirdiği, oldukça yapay hücre modelleri dışında, hastalıkla ilişkili mutasyonları taşıyan hastaların primer fibroblast görünüşte önemli patolojik özellikler o yansıtacakf insan hastalığı.
Burada, cilt biyopsi alınarak kültür insan fibroblastlar ve mitokondriyal fenotipleri tanımlamak için gerekli mikroskobik teknikler ayrıntılı protokolleri kullanarak prosedürü tasvir. Bunlar mitokondriyal fonksiyon ve dinamikleri ile ilgili olan PD ile ilişkili farklı özelliklerini incelemek amacıyla kullanılmıştır. Ex vivo, mitokondri lizozom yolağı yoluyla fonksiyonu, morfolojisi, lizozomlar (organeller aşağılayıcı işlevsiz mitokondri) ve bozulması ile ko açısından analiz edilebilir . Bunlar fenotipleri PD erken belirtileri belirlenmesi için son derece önemli olan ve insan hastalığı-gen taşıyıcılarında klinik motor semptomlar öncesinde olabilir. Dolayısıyla, burada sunulan testlerin nörodejenerasyon patolojik özelliklerini belirlemek ve PD yeni tedavi stratejileri tanımlamak için yardımcı olacak değerli bir araç olarak kullanılabilir.
Ex vivo modeller olarak Hasta deri fibroblast hastalıkla ilişkili genetik bozukluklar karakterize etmek için önemli bir araç haline gelir. Buna ek olarak, deri türevi fibroblastlar kolayca erişilebilir ve kültür üzerine genişletilmiş olabilir. Bunlar endojen gen hastalığa neden olan, ancak etkilenen bireyin tüm genetik arka plan da içerir nedenle, PD ile ilişkili genetik mutasyonu taşıyan hastadan elde edilen birincil hücreler tümör hücre hatları üzerinde kullanılması tercih edilir. B…
The authors have nothing to disclose.
Bu çalışma Fritz Thyssen Vakfı (RK 10.11.2.153), Alman Araştırma Kurumu (DFG, KR2119/3-2 ve RK KR2119/8-1), Eğitim Federal ve Araştırma Bakanlığı (BMBF hibeleri tarafından desteklenen , NGFNplus; RK 01GS08134) ve [LFB için] hayırsever Hertie Vakfı Doktora Bursu. Biz video çekimi sırasında verdikleri destek nedeniyle Carolin Obermaier ve Julia Westermeier ederim.
Name of reagent | Company | Catalogue no. |
Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 medium | Invitrogen | 52400-025 |
RPMI 1640 medium, no Phenol Red | Invitrogen | 11835-063 |
Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline (DPBS) | Invitrogen | 14190-094 |
Fibroblast growth factor 2 (FGF2) | PeproTech | 100-18B |
AccuMax (detachment solution) | PAA | L11-008 |
Lab-TekTMII chambered coverglasses | Nalge Nunc International | 115382 |
Tetramethylrodamine ethyl ester (TMRE) | Invitrogen | T-669 |
Mitotracker Green FM | Invitrogen | M-7514 |
Mitotracker CM-H2XRos | Invitrogen | M-7513 |
Lyostracker Red DND-99 | Invitrogen | L-7528 |
Hoechst 33342 | Invitrogen | H-3570 |
Table 1. Specific reagents and equipment.