Subretinale Injectie van gentherapievectoren en stamcellen in de Mouse Eye
Summary
Deze chirurgische techniek illustreert de injectie van gentherapievectoren en stamcellen in de subretinale ruimte van de muis oog.
Abstract
Het verlies van het gezichtsvermogen treft ongeveer 3,4 miljoen mensen in de Verenigde Staten en zal naar verwachting toenemen in de komende jaren. 1 Onlangs, gentherapie en stamceltransplantaties zijn geworden belangrijke therapeutische instrumenten voor de behandeling van blindheid als gevolg van retinale degeneratieve ziekten. Verschillende vormen van autologe transplantatie voor leeftijdsgebonden maculaire degeneratie (AMD), zoals iris pigment epitheelcellen transplantatie hebben bemoedigende resultaten gegenereerd en klinische proeven begonnen voor andere vormen van gen en stamceltherapieën. Twee waaronder RPE65 genvervanging bij patiënten met congenitale amaurosis Leber en een RPE celtransplantatie met humane embryonale stamcellen (ES) cellen bij de ziekte van Stargardt. 3-4 Nu er gentherapievectoren en stamcellen voor behandeling van patiënten met retinale ziekten is het belangrijk te verifiëren deze potentiële therapieën in diermodellen voor toepassingden om in menselijke studies. De muis is een belangrijke wetenschappelijke model voor het testen van de therapeutische werkzaamheid van gentherapievectoren en stamceltransplantatie in het oog. 5-8 in dit video artikel zullen we een techniek om gentherapievectoren of stamcellen injecteren in de subretinale ruimte van de muis oog terwijl het minimaliseren van schade aan het omringende weefsel.
Protocol
Representative Results
Discussion
Deze video techniek bevat instructies voor het voltooien van de injectie subretinale chirurgische procedure succesvol, en ervoor zorgen dat de vector voor gentherapie of stamcellen worden in de locatie noodzakelijk zijn om doelmatig behandelen oogziektes. Deze techniek maakt de targeting van retinale cellen zoals RPE of de fotoreceptoren, omdat hierdoor de gentherapievectoren of stamcellen afgeleide weefsels in de nabijheid van deze cellen. Vorige methoden te intravitreale injecties, waar de vloeistof wordt geplaatst in…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Onderzoek naar blindheid te voorkomen; Experimentele hulp van Takayuki Nagasaki; Dit onderzoek voldoet aan de Arvo verklaring voor het gebruik van dieren in Oogheelkundige en Visual Research. KJW wordt ondersteund door NIH subsidie 5T32EY013933 en 5T32DK007647-20. VBM wordt ondersteund door NIH subsidie K08EY020530.
Materials
| Name | Company | Catalog | Comments |
| 0.8-1.10 x 100 mm Capillary Tube (glass) | Kimble Glass, Inc. | 34502 99 | |
| Flaming/Brown Micropipette Puller | Sutter Instrument | P-97 | Narishige microforge can be used instead. Catalog #MF-900 |
| Sigmacote | Sigma Aldrich | SL2-25ML | Silicone |
| Dubecco’s Phosphate Buffered Saline with Calcium Chloride and Magnesium Chloride | Gibco-Invitrogen | 14040-133 | |
| Safety-Lok 25 3/4G x 12″; Blood Collection Set | B-D Vacutainer | 367298 | |
| 1 ml Sub-Q 26 5/8G Slip-Tip Syringe | Becton-Dickinson | 309597 | |
| 0.5-10 μl Finnpipette II Adjustable-Volume Pipetter | Fisherbrand | 21-377-815 | |
| 1-200 μl Natural Beveled Tips | USA Scientific, Inc. | 1111-1700 | |
| Discovery.V8 Stereo Microscope | Zeiss | MC1500 | |
| 60 mm x 15 mm Style Treated Polystyrene Cell Culture Dish | Corning Incorporated | 430166 | |
| Vannas Straight Scissors | Storz Ophthalmics | E3383 S | |
| Curved Dressing Forceps with Serrations Delicate | Storz Ophthalmics | E1408 | |
| 15 Degree Microsurgery Knife | Wilson Ophthalmic Corp. | 091204 | |
| Ketamine | Ketaset III | NADA #45-290 | |
| Xylazine | Lloyd Laboratories | NADA #139-236 | |
| Bupivacaine (Marcaine) | AstraZeneca | N/A | |
| Buprenorphine | Sigma Aldrich | B9275 |
Riferimenti
- Abe, T. Regeneration of the retina using pigment epithelial cell transplantation. Nihon Ganka Gakkai Zasshi. 106, 778-803 (2002).
- Jacobson, S. G., Cideciyan, A. V., Ratnakaram, R., Heon, E., Schwartz, S. B., Roman, A. J., Peden, M. C., Aleman, T. S., Boye, S. L., Sumaroka, A., et al. Gene therapy for Leber congenital amaurosis caused by RPE65 mutations: safety and efficacy in 15 children and adults followed up to 3 years. Arch. Ophthalmol. 130, 9-24 (2011).
- Schwartz, S. D., Hubschman, J. P., Heilwell, G., Franco-Cardenas, V., Pan, C. K., Ostrick, R. M., Mickunas, E., Gay, R., Klimanskaya, I., Lanza, R. Embryonic stem cell trials for macular degeneration: a preliminary report. Lancet. 379, 713-720 (2012).
- Wang, N. K., Tosi, J., Kasanuki, J. M., Chou, C. L., Kong, J., Parmalee, N., Wert, K. J., Allikmets, R. Transplantation of reprogrammed embryonic stem cells improves visual function in a mouse model for retinitis pigmentosa. Transplantation. 89, 911-919 (2010).
- Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -. S. Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy. Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).
- Tosi, J., Sancho-Pelluz, J., Davis, R. J., Hsu, C. W., Wolpert, K. V., Sengillo, J. D., Lin, C. S., Tsang, S. H. Lentivirus-mediated expression of cDNA and shRNA slows degeneration in retinitis pigmentosa. Exp. Biol. Med. 236, 1211-1217 (2011).
- Tucker, B. A., Park, I. H., Qi, S. D., Klassen, H. J., Jiang, C., Yao, J., Redenti, S., Daley, G. Q., Young, M. J. Transplantation of adult mouse iPS cell-derived photoreceptor precursors restores retinal structure and function in degenerative mice. PLoS One. 6, e189992 (2011).
- Mahajan, V. B., Mondino, B. J., Tsang, S. H. . A high-throughput Mouse Eye Phenomics System. , (2010).
- Chang, B., Hawes, N. L., Hurd, R. E., Davisson, M. T., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R. Retinal degeneration mutants in the mouse. Vision Res. 42, 517-525 (2002).
- Hawes, N. L., Smith, R. S., Chang, B., Davisson, M., Heckenlively, J. R., John, S. W. Mouse fundus photography and angiography: a catalogue of normal and mutant phenotypes. Mol. Vis. 5, 22 (1999).
- Won, J., Shi, L. Y., Hicks, W., Wang, J., Hurd, R., Naggert, J. K., Chang, B., Nishina, P. M. Mouse model resources for vision research. J. Ophthalmol. 2011, 391384 (2011).
