Subretinal Injektion av genterapivektorer och stamceller i musen ögat
Summary
Denna kirurgiska tekniken illustrerar injektion av genterapivektorer och stamceller i det subretinala utrymmet i musens ögat.
Abstract
Förlusten av synen drabbar cirka 3,4 miljoner personer i USA och förväntas öka under de kommande åren. 1 Nyligen har genterapi och stamceller transplantationer cell blir viktiga terapeutiska verktyg för att behandla blindhet till följd av retinala degenerativa sjukdomar. Flera former av autolog transplantation för åldersrelaterad makuladegeneration (AMD), som iris pigment epitelial celltransplantation, har genererat uppmuntrande resultat, och kliniska studier har börjat för andra former av gen-och stamcellsterapi. 2 Dessa inkluderar RPE65 gen utbyte hos patienter med Leber: s medfödda amauros och RPE celltransplantation med humana embryonala stamceller (ES-celler) i Stargardts sjukdom. 3-4 Nu när det finns genterapi vektorer och stamceller finns för behandling av patienter med retinal sjukdomar är det viktigt att kontrollera dessa potentiella behandlingar i djurmodeller tillämpas föreIng dem i humanstudier. Musen har blivit en viktig vetenskaplig modell för att testa den terapeutiska effekten av vektorer genterapi och stamcellstransplantation i ögat. 5-8 I denna video artikeln presenterar vi en teknik för att injicera genterapivektorer eller stamceller i det subretinalområdet av musen ögat samtidigt minimera skador på omgivande vävnad.
Protocol
Representative Results
Discussion
Denna video teknik ger anvisningar om hur man fyller det subretinala injektionen kirurgiska ingrepp framgångsrikt, och se till att genterapi vektor eller stamceller placeras på den plats som krävs för att effektivt behandla oftalmiska sjukdomen. Denna teknik möjliggör inriktning av retinala celler såsom RPE eller fotoreceptorer, eftersom det ger genterapivektorer eller stamceller härledda vävnader i närheten av dessa celler. Tidigare metoder som intravitreala injektioner, där vätskan är placerad inuti i gla…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Forskning för att förhindra blindhet, Experimentell hjälp från Takayuki Nagasaki, Denna forskning uppfyller ARVO uttalande för användning av djur i Ophthalmic och Visual Research. KJW stöds av NIH bidrag 5T32EY013933 och 5T32DK007647-20. VBM stöds av NIH bidrag K08EY020530.
Materials
| Name | Company | Catalog | Comments |
| 0.8-1.10 x 100 mm Capillary Tube (glass) | Kimble Glass, Inc. | 34502 99 | |
| Flaming/Brown Micropipette Puller | Sutter Instrument | P-97 | Narishige microforge can be used instead. Catalog #MF-900 |
| Sigmacote | Sigma Aldrich | SL2-25ML | Silicone |
| Dubecco’s Phosphate Buffered Saline with Calcium Chloride and Magnesium Chloride | Gibco-Invitrogen | 14040-133 | |
| Safety-Lok 25 3/4G x 12″; Blood Collection Set | B-D Vacutainer | 367298 | |
| 1 ml Sub-Q 26 5/8G Slip-Tip Syringe | Becton-Dickinson | 309597 | |
| 0.5-10 μl Finnpipette II Adjustable-Volume Pipetter | Fisherbrand | 21-377-815 | |
| 1-200 μl Natural Beveled Tips | USA Scientific, Inc. | 1111-1700 | |
| Discovery.V8 Stereo Microscope | Zeiss | MC1500 | |
| 60 mm x 15 mm Style Treated Polystyrene Cell Culture Dish | Corning Incorporated | 430166 | |
| Vannas Straight Scissors | Storz Ophthalmics | E3383 S | |
| Curved Dressing Forceps with Serrations Delicate | Storz Ophthalmics | E1408 | |
| 15 Degree Microsurgery Knife | Wilson Ophthalmic Corp. | 091204 | |
| Ketamine | Ketaset III | NADA #45-290 | |
| Xylazine | Lloyd Laboratories | NADA #139-236 | |
| Bupivacaine (Marcaine) | AstraZeneca | N/A | |
| Buprenorphine | Sigma Aldrich | B9275 |
Riferimenti
- Abe, T. Regeneration of the retina using pigment epithelial cell transplantation. Nihon Ganka Gakkai Zasshi. 106, 778-803 (2002).
- Jacobson, S. G., Cideciyan, A. V., Ratnakaram, R., Heon, E., Schwartz, S. B., Roman, A. J., Peden, M. C., Aleman, T. S., Boye, S. L., Sumaroka, A., et al. Gene therapy for Leber congenital amaurosis caused by RPE65 mutations: safety and efficacy in 15 children and adults followed up to 3 years. Arch. Ophthalmol. 130, 9-24 (2011).
- Schwartz, S. D., Hubschman, J. P., Heilwell, G., Franco-Cardenas, V., Pan, C. K., Ostrick, R. M., Mickunas, E., Gay, R., Klimanskaya, I., Lanza, R. Embryonic stem cell trials for macular degeneration: a preliminary report. Lancet. 379, 713-720 (2012).
- Wang, N. K., Tosi, J., Kasanuki, J. M., Chou, C. L., Kong, J., Parmalee, N., Wert, K. J., Allikmets, R. Transplantation of reprogrammed embryonic stem cells improves visual function in a mouse model for retinitis pigmentosa. Transplantation. 89, 911-919 (2010).
- Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -. S. Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy. Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).
- Tosi, J., Sancho-Pelluz, J., Davis, R. J., Hsu, C. W., Wolpert, K. V., Sengillo, J. D., Lin, C. S., Tsang, S. H. Lentivirus-mediated expression of cDNA and shRNA slows degeneration in retinitis pigmentosa. Exp. Biol. Med. 236, 1211-1217 (2011).
- Tucker, B. A., Park, I. H., Qi, S. D., Klassen, H. J., Jiang, C., Yao, J., Redenti, S., Daley, G. Q., Young, M. J. Transplantation of adult mouse iPS cell-derived photoreceptor precursors restores retinal structure and function in degenerative mice. PLoS One. 6, e189992 (2011).
- Mahajan, V. B., Mondino, B. J., Tsang, S. H. . A high-throughput Mouse Eye Phenomics System. , (2010).
- Chang, B., Hawes, N. L., Hurd, R. E., Davisson, M. T., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R. Retinal degeneration mutants in the mouse. Vision Res. 42, 517-525 (2002).
- Hawes, N. L., Smith, R. S., Chang, B., Davisson, M., Heckenlively, J. R., John, S. W. Mouse fundus photography and angiography: a catalogue of normal and mutant phenotypes. Mol. Vis. 5, 22 (1999).
- Won, J., Shi, L. Y., Hicks, W., Wang, J., Hurd, R., Naggert, J. K., Chang, B., Nishina, P. M. Mouse model resources for vision research. J. Ophthalmol. 2011, 391384 (2011).
