인간의 장내 점막의 Explants의 문화와 편광 자극을위한 새로운 방법
Summary
우리는 적어도 24 시간 동안 자극의 다양한 종류에 대한 응답의 문화와 모니터링 인간의 장 점막의 유지 관리를위한 새로운 방법을 소개합니다. 우리의 방법으로, 조직의 극성이 혀끝의 경로를 통해 생리적 자극 수 있도록 유지됩니다.
Abstract
몇 가지 모델은 현재 현실적으로 상호 작용의 다양한 일어나는 복잡한 인간의 대장의 미세 환경을 시뮬레이션하기 위해 존재한다. 동시에 실수로 음식을 섭취하는 병원성 미생물에 대하여 효과적인 면역 반응을 설치하는 동안 그들은 음식 항원에 대한 전체 면역 반응을 유도 내성 형성으로 적절한 항상성이 직접 이러한 상호 작용에 따라 달라집니다.
장내 항상성은 점액의 부착 / 분해를 조절하는 미생물 (식품 관련 유익한 박테리아 변종 포함)와 호스트 간의 여러 복잡한 상호 작용을 통해도 보존되어, 상피 장벽 항균 펩타이드의 생산, 그리고 "교육" 인구의 고유, 장내 상주 림프 세포의 tolerogenic 또는 면역 표현형 제어 '를 상피 세포. 이러한 상호 작용은 생체 분석에로 재현하는 지금까지 매우 어려웠을배양 세포주 또는 말초 혈액 단핵 세포를 사용하여. 또한, 마우스 모델은 인간의 창자에 대하여 장 점막 (점액 층 조직, 공생 박테리아 사회)의 구성 요소에 실질적으로 차이가 있습니다. 따라서, 이러한 과민성 대장 증후군, 염증성 장 질환이나 대장 암과 같은 중요한 스트레스 관련 또는 병적 조건을 병원에 데려 수 치료의 다양한 연구가 수행하기 어려운되었습니다.
이러한 문제를 해결하기 위해, 우리는 우리가 편광 방식으로, 호스트 미생물 및 면역 반응에 의해 현장 조화에서 자신을 유지 인간의 창자 점막의 절편을 자극 할 수있는 새로운 시스템을 개발했다. 편광 혀끝의 자극의 결과에 대한 매우 중요 면역 반응을 이끌어. 그것은 반복적으로 그들이 장 EPI의 정점 얼굴을 무시할 때 동일한 자극이 완전히 다른 반응을 일으킬 수 것으로 나타났습니다thelium, basolaterally 상피 세포를 자극하거나 고유 층의 구성 요소와 직접 접촉으로 오는 tolerogenic에서 면역 원성에 대한 표현형을 전환하고 지역에서 불필요하고 과도한 염증을 일으키는 원인.
우리는 접착에 의해 점막의 정점 얼굴에 자극의 영역이 같은 프로토콜에 설명한다 구분 동굴 실린더 편광 자극을 달성했다. 우리는 다른 세 가지 유산균 균주의 차등 효과 사이 검토하기 위해이 모델을 사용했다. 우리는이 모델 시스템이 건강과 질병 상태에서 프로바이오틱스의 면역 특성을 평가하는 매우 강력한 것을 보여줍니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
인간의 장 점막에 대한 치료가 유효하게 테스트 할 수있는 생리학 관련 모델에 대한 필요성은 오랫동안 강조하고있다. 많은 연구자들은 그 목적을 위해 지금까지 사용한 셀 5와 마우스 모델 모두 6 잠재적 인 유물과 결함을 발견했습니다. 유망한 전임상 데이터가 자주 얻을 수있다하더라도, 실제로, 이들은 거의 중요한 임상 이득으로 변환하지 않습니다.
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Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 산소 챔버를 제공하는 우수한 기술 지원 및 박사 안토니오 디 Sabatino의를 위해 에리카 Mileti 감사합니다.
자금 조달 : MR에와 폰다 치오 Cariplo와 마리 퀴리 국제 교육 이동성 네트워크 (크로스 토크 부여 계약 번호 : 21553-2)에 의해 지원 :이 작품은 7 EU 프레임 워크 프로그램 (Dendroworld IBDase, ERC)에서 교부금에 의해 지원되었다 KT.
Materials
| Regeant | Company | Catalog No. | |
| Reagents | |||
| 10X HBSS | Eurocalne | ECM4006XL | |
| Peni/Strepto | Lonza | DE17602E | |
| Gentamycin | Gibco | 15750-037 | |
| DMEM | Lonza | BE12614 | |
| FBS-Na | Gibco | 16000-044 | |
| 100X ITS-X | Gibco | 51500-056 | |
| EGF | Tebu-bio | 100-15 | |
| L-Glutamine | Lonza | BE17605E | |
| Non essential aminoacids 100X | Gibco | 11140-035 | |
| NaPyr | Gibco | 11360-039 | |
| Materials | |||
| Cloning cylinders 6×8 mm | BellCo | 2090-00608 | |
| Cloning cylinders 8×8 mm | BellCo | 2090-0080 | |
| Cloning cylinders 10×10 mm | BellCo | 2090-01010 | |
| Metal grids | Home made | ||
| Centre well organ culture plate | BD Falcon | 353037 | |
| Surgical glue (Vetbond) | 3M | 1469SB | |
| Oxygen Jars | Home made | ||
| Oxygen tanks | Air Liquid Sanità |
Riferimenti
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