质量流式细胞术：协议，每日调整和执行细胞的样品上一个CyTOF的质量流式细胞仪
Summary
日常调整和优化的性能的CyTOF质量流式细胞仪所必需的步骤说明。上最佳的样品制备和流速的评论讨论
Abstract
在最近几年中，单个细胞的快速分析通常被执行采用流式细胞仪和荧光标记的抗体。但是，这个问题限制了数量的同时探针的荧光光谱重叠排放。相反，新的CyTOF质量流式细胞仪由DVS科学夫妇液体单细胞引入系统的ICP-MS 1而不是荧光，螯合聚合物含有高度富集的金属同位素被连接到抗体或其它特异性探针。2-5由于金属的纯度和质量分辨率的流式细胞仪的质量，有没有“光谱重叠”从相邻的同位素，因此，没有必要的补偿矩阵。此外，由于使用的镧系金属，有没有生物的背景，因此没有等效的自发荧光。有了一个质量窗口跨越原子质量103-203，理论上可达100个标签同时可以区分。目前，35个以上的信道可使用的螯合试剂可从DVS科学允许前所未有的夹层的免疫学的档案样本6-7
大规模流式细胞术的缺点包括每一个单独的金属同位素探针（没有相当于向前或侧向散射光），和事实，即它是一种破坏性技术（没有分拣恢复的可能性）的严格要求。流式细胞仪的质量的当前配置，还具有的小区传输率只有〜25％，因此需要较高的输入的细胞数。
日优化性能的质量仪需要几个步骤。优化的基本目标是最大化所需金属同位素（M）的所测量的信号强度，而形成的氧化物（M 16），将减少与任何所需的信号，在M 16的M信号强度和干扰最小化。第一步是热身机器，使一热，稳定的ICP血浆已经建立。其次，电流和补充气体流率的设置，必须在每日的基础上进行了优化。在样品的采集，最大细胞事件发生率是由检测器的效率和1000个细胞/秒的处理速度的限制。然而，根据较慢的细胞事件的发生率（300-500个细胞/秒）上的样品的质量，通常是可取的，以允许更好的分辨率细胞之间发生的事件，从而最大限度地提高对双峰和碎片完好汗衫。最后，足够的清洗的机器在一天结束时，可以尽量减少背景信号由于游离金属。
Protocol
Representative Results
Discussion
在过去的几十年里，荧光流式细胞仪分析单个细胞的主力的方法，无论是在表面的表达和功能分析。然而，问题的荧光染料的光谱重叠的同步标记的数量有限制。虽然已有报道，实验中使用12个以上的同时标记所需的补偿量，使得此技术上有困难。
相反的荧光，质量仪率先由DVS科学使用螯合网站的聚合物的金属标签的抗体。1-3由于纯度的金属和ICP-MS质量分辨率，没有?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们想，感谢埃文·纽厄尔博士和博士肖恩Bendall反馈。我们还要感谢DVS科学博士和肖恩Bendall的样本的多含稀土的聚苯乙烯微球。我们感谢经费由美国国立卫生研究院授予U19 AI057229。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| CyTOF mass cytometer | DVS Sciences | ||
| Wash solution | DVS Sciences | 201071 | 0.05% hydrofluoric acid in water |
| Tuning solution | DVS Sciences | 201072 | 0.5 ppm La, Cs, Tb, Tm, Ir, trace nitric acid |
| Eu-containing polystyrene beads | DVS Sciences | 201073 | Contains natural-abundance Eu isotopes; beads supplied at approximately 1 million/ml |
| Multi-lanthanide-containing (La/Pr/Tb/Tm/Lu)- polystyrene beads | DVS Sciences | Not yet commercially-available | Contains natural-abundance isotopes of listed lanthanides |
| Nitric acid (concentrated) | Fisher Scientific | A467-500 | Optima trace-metal pure ICP-MS grade |
| Polystyrene round-bottom tube with cell-strainer cap-5 ml | BD | 352235 | used to filter cell samples before injection |
| Norm-Ject tuberkulin syringe-1 ml | Henke Sass Wolf | 4010-200V0 | silicone-free, latex-free |
| Norm-Ject syringe-3 ml | Henke Sass Wolf | 4010.000V0 | silicone-free, latex-free |
| MilliQ water | 18 MΩ pure water; must not be stored in glass or plastic bottles that have been washed with commercial detergent (due to their high levels of barium present). | ||
| Citranox | Sigma-Aldrich | Z273236 | acid detergent |
| Argon gas | Praxair | AR 5.0UH-T | 99.999% Ultra-high purity |
Riferimenti
- Bandura, D. R. Mass cytometry: Technique for real time single cell multitarget immunoassay based on inductively coupled plasma Time-of-Flight mass spectrometry. Anal. Chem. 81, 6813-6822 (2009).
- Lou, X. Polymer-based elemental tags for sensitive bioassays. Angew. Chem., Int. Ed. 46, 6111-6114 (2007).
- Majonis, D. Curious results with palladium- and platinum-carrying polymers in mass cytometry bioassays and an unexpected application as a dead cell stain. Biomacromolecules. 12, 3997-4010 (2011).
- Leipold, M. D. Development of mass cytometry methods for bacterial discrimination. Anal. Biochem. 419, 1-8 (2011).
- Bendall, S. C. Single-cell mass cytometry of differential immune and drug responses across a human hematopoietic continuum. Science. 332, 687-696 (2011).
- Newell, E. W. Cytometry by Time-of-Flight shows combinatorial cytokine expression and virus-specific cell niches within a continuum of CD8+ T cell phenotypes. Immunity. 36, 142-152 (2012).
