Apoptotik hücresi Temizliği görüntülenmesi sırasında Canlı<em> Drosophila</em> Embriyo
Summary
Burada apoptotik hücre boşluk dinamikleri eğitim için etkili bir yöntem tarif<em> In vivo</em>. Bu yöntem canlı istihdam<em> Drosophila</em> Apoptotik hücre ve fagositlerle belirli etiketleme ile apoptotik hücrelerin fagositoz izlenmesi için güçlü bir model olarak embriyolar.
Abstract
Apoptoz ve sonraki fagositoz yoluyla istenmeyen veya anormal hücrelerin uygun ortadan kaldırılması (apoptotik hücre boşluk) Tüm metazoan organizmaların normal gelişimi için çok önemlidir. Apoptotik hücre boşluk yakından hücre ölümü ile ilgili son derece dinamik bir süreçtir; unengulfed apoptotik hücrelerin ancak normal şartlar altında in vivo olarak görülür. Apoptotik hücre boşluk farklı adımları anlamak için ve 'profesyonel' fagositler karşılaştırmak için – için makrofajlar ve dendritik hücreler 'profesyonel olmayan' – doku yerleşik komşu hücreler, sürecin in vivo canlı görüntüleme son derece değerlidir. Burada canlı Drosophila embriyolar apoptotik hücre boşluk eğitim için bir protokol açıklar. Biz apoptotik hücreleri ve fagositler için özel işaretleri kullanmak fagositoz farklı adımların dinamiklerini takip etmek. Ayrıca, paralel olarak iki fagosit sistemleri izleyebilirsiniz: 'profesyonel' makrofajlar ve 'yarı-profeGelişmekte olan merkezi sinir sisteminde ssional 'glial (MSS). Burada anlatılan yöntemi apoptotik hücre boşluk gerçek zamanlı çalışmalar için mükemmel bir model olarak Drosophila embriyo kullanır.
Introduction
Apoptoz ve sonraki fagositoz yoluyla istenmeyen veya anormal hücrelerin ortadan kaldırılması uygun embriyo gelişimi için hem de yetişkin doku homeostazında için çok önemlidir. Apoptotik hücreler veya apoptotik hücre boşluk fagositoz dört adımda ilerler son derece dinamik bir süreçtir: apoptotik hücreye fagositler (1) işe ('bulmak-me'), fagositoz için bir hedef olarak hücrenin (2) tanıma ( '-Bana yemek') ve (3) yutulmasına, apoptotik parçacık 1-5 (4) phagosome olgunlaşma ve yıkımı izledi. 'Profesyonel' makrofajlar ve olgunlaşmamış dendritik hücreler, ve 'profesyonel olmayan' doku yerleşik komşu hücreleri, metazoan geliştirme 6,7 sırasında apoptotik hücre izni için önemli olan: fagositler iki türü vardır.
Drosophila gelişimi apoptoz yoluyla gereksiz hücrelerin giderilmesi üç m oluşurgeç embriyo için orta ilk, sonra orta pupa ve yine erken yetişkin ain aşamaları,. Embriyogenez sırasında apoptotik parçacıklar 'profesyonel' fagositler, makrofajlar, ve 'profesyonel olmayan' ektoderm ve glia 8,9 ile çıkarılır.
Daha önceki çalışmada biz embriyogenez sırasında fagositik hücrelerde sadece ifade bir fagositik reseptör, Altı mikron-altı (SIMU), belirledik. Simu organizatörü kullanarak bize canlı bir gelişen embriyonun 8 eş zamanlı olarak makrofajlar, ektoderm ve glia izlemeniz için fagositik hücre popülasyonlarının (simu-cytGFP) için özel bir belirteç oluşturulur. Buna ek olarak, apoptoz farklı aşamalarında apoptotik hücreler için özel işaretleri kullanarak, in vivo apoptotik hücre boşluk dinamiklerini takip edebiliyoruz.
Protocol
Representative Results
Discussion
Apoptotik hücre boşluk son derece dinamik apoptoz, kritik bir son aşamadır. Bu nedenle işlem gerçek zamanlı çalışmalar büyük önem taşımaktadır. Burada gelişmekte olan Drosophila embriyolar canlı apoptotik hücre boşluk izlenmesi sağlayan bir protokol açıklar. Apoptotik hücreleri ve fagositler: Bu prosedürde, hücrelerin iki nüfus özel işaretleri kullanılarak işaretlenmiş olmalıdır. Simu-cytGFP raportör aynı embriyo eş zamanlı olarak fagositik makrofajlar, glia ve ekt…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma Marie Curie (IRG249084) tarafından desteklenmiştir. Biz Kurant laboratuar tüm üyeleri teşekkür ederiz.
Materials
| Reagent | |||
| Annexin V | Molecular Probes | A35108 | |
| PhiPhiLux G2D2 | OncoImmunin | A304R2G-5 | |
| LysoTracker | Molecular Probes | L-7528 | |
| Halocarbon oil 700 | Sigma | H8898 | |
| Material | |||
| Capillary tubing | FHC | 30-30-0 | |
| Cell Strainer | SPL | 93100 | |
| Paintbrush |
References
- Kinchen, J. M. A model to die for: signaling to apoptotic cell removal in worm, fly and mouse. Apoptosis. 15, 998-1006 (2010).
- Kinchen, J. M., Ravichandran, K. S. Phagosome maturation: going through the acid test. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 9, 781-795 (2008).
- Kinchen, J. M., Ravichandran, K. S. Phagocytic signaling: you can touch, but you can’t eat. Curr. Biol. 18, 521-524 (2008).
- Stuart, L. M., Ezekowitz, R. A. Phagocytosis: elegant complexity. Immunity. 22, 539-550 (2005).
- Lauber, K., Blumenthal, S. G., Waibel, M., Wesselborg, S. Clearance of apoptotic cells: getting rid of the corpses. Mol. Cell. 14, 277-287 (2004).
- Henson, P. M., Hume, D. A. Apoptotic cell removal in development and tissue homeostasis. Trends Immunol. 27, 244-250 (2006).
- Kurant, E. Keeping the CNS clear: glial phagocytic functions in Drosophila. Glia. 59, 1304-1311 (2011).
- Kurant, E., Axelrod, S., Leaman, D., Gaul, U. Six-microns-under acts upstream of Draper in the glial phagocytosis of apoptotic neurons. Cell. 133, 498-509 (2008).
- Mergliano, J., Minden, J. S. Caspase-independent cell engulfment mirrors cell death pattern in Drosophila embryos. Development. 130, 5779-5789 (2003).
- van den Eijnde, S. M., et al. Cell surface exposure of phosphatidylserine during apoptosis is phylogenetically conserved. Apoptosis. 3, 9-16 (1998).
