嫁接动脉硬化的小鼠模型
Summary
我们描述了协议我们的鼠标接枝arteriosclerois的的模型（GA）涉及鼠标容器段插入到相同的近交系的收件人。通过回交额外的遗传变为血管捐助，该模型可以评估特定基因遗传的影响。
Abstract
接枝arteriosclerois的（GA），也称为移植物血管病变，是经过数月至数年在弥漫，整个移植血管树的圆周狭窄的移植器官的特点，开发一个病理病变。 GA发病的最重要组成部分是内膜平滑肌细胞内的增殖。当一个人冠状动脉段被插入到红外线的免疫缺陷小鼠的肾主动脉的内膜可以扩大在人类T细胞过继转移反应同种异体动脉供体或外源性的人IFN-γ中的人T细胞的缺乏。从一株成另一种小鼠品系收件人鼠标主动脉介入有限，因为人类的慢性排斥反应的模型，因为这种小鼠模型中的急性细胞介导的排斥反应，完全消除所有捐助源性血管内细胞移植两三个周。最近，我们已经开发了两种新的m乌斯模型来规避这些问题。第一种模式涉及从雄性小鼠的血管段插入到相同的近交系（C57BL/6J）一名女收件人。次要组织相容性抗原编码的Y染色体（本在男但不是女）的，随之而来的是足够了几个星期，懒惰保留供体来源的平滑肌细胞的排斥反应，移植物排斥在这种情况下，仅仅针对的。第二个模型涉及动脉段插入到主机从一个野生型C57BL/6J鼠标的捐助鼠标一脉相承和性别，缺乏干扰素受体-γ其次是管理的鼠标IFN-γ（通过感染的鼠标交付肝脏的腺病毒载体。没有在这种情况下，作为供体和受体的小鼠相同的应变和性别，但供体平滑肌细胞增殖中的细胞因子，而宿主来源的细胞，缺乏受体抑制这种细胞因子，反应迟钝。通过回交附加到容器中供体的基因变化，这两种模式可以用于特定基因的遗传进展的效果进行评估。在这里，我们描述了我们的鼠标GA模型的详细协议。
Introduction
接枝arteriosclerois的（GA），也称为移植物血管病变，是一个在移植器官的特点是弥漫性，圆周狭窄整个移植血管树7个月至数年发展的病理损害。早期阶段可能会导致偏心和焦距狭窄的动脉更明显，从而更紧密地类似看出，在传统的动脉粥样硬化狭窄。移植物血管内膜膨胀的结果，由于宿主的T细胞和巨噬细胞的浸润，特别是积累的细胞外基质和平滑肌细胞样细胞的管腔丢失源于接枝，主机或两个5，13，19，是不充分的补偿出境船舶重塑。临床上最显着的病变是心脏移植，心外膜和心肌内冠状动脉。最终，乔治亚州的冠状动脉将导致缺血性心脏衰竭。 GA是心脏GR年底的主要原因船尾损失。停在狭窄的GA缝合线，强烈暗示其发病移植同种抗原主机响应和领导分类GA作为一种慢性排斥反应3。然而，其他形式的动脉损伤可能增加GA的风险，可以通过增加净负担受伤或通过加强和/或调节同种免疫反应。接枝动脉的内皮细胞（EC）的衣料是保存在人类遗传算法和最表面的内膜的区域的相邻EC衣料宿主来源的IFN-γ产生的T细胞和巨噬细胞11，在最严重的渗透是在网站上一些患者供体特异性自身抗体，结合移植EC 16，但船只的发展是与GA表明几乎没有证据表明纤维素样坏死为特征的急性抗体介导的排斥11。
GA发病的最重要组成部分，是内膜平滑肌细胞内增殖，如果这个过程中可能会被逮捕，，GA是不可能的进步。我们组以前的工作表明，人类冠状动脉节段的内膜，插入红外线肾免疫缺陷小鼠主动脉扩大继转移的人类T细胞异体动脉捐助的，并且这个过程中和人干扰素可以抑制γ18。此外，外源人IFN-γ的可能导致内膜（内侧）在没有人类T细胞15，17在这些动脉移植物的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖。 （这是重要的要注意，人类和小鼠IFN-γ不跨越物种，排除鼠标在这个实验系统主机的间接影响。）这些人性化的小鼠模型，谈到人类Ţ细胞/血管细胞相互作用的利益和内膜病变主要是由人类细胞（ 即移植派生）已观察到的临床标本中，但它们完全不重述临床情况，因为它们忽略宿主巨噬细胞和可能的其他类型的细胞的作用，在临床移植病变。在此过程中常规的小鼠模型理论上可以解决这个问题，有一个完整的宿主的免疫系统，并提供附加的优点，允许功率基因小鼠的方法被应用到GA补充人源化模型的限制。两个最广泛使用的小鼠模型涉及异位心脏移植和原位动脉移植1。异位心脏移植的动脉病变的发展主要是由宿主细胞，骨髓起源可能，而人类心脏移植的动脉内膜细胞主要是移植原点5，13，19。这是一个显着的区别，使我们开发替代小鼠模型。介入的鼠标主动脉另一个鼠标应变收件人一株成是人类慢性排斥反应的模型更为有限，因为急性细胞介导的排斥反应，这种小鼠模型完全消除所有捐助源性血管内细胞移植两三个第19周。因此，随后的变化中看到插入血管段是单纯的响应宿主细胞重新填充脱细胞血管支架，创造一个的高人造的情况作为模型移植血管的变化发生在诊所的相关性有限。最近，我们已经开发了两个新的小鼠模型来规避这些问题21。第一种模式涉及从雄性小鼠的血管段插入到相同的近交系（C57BL/6J）一名女收件人。第二个模型涉及到主机鼠标缺乏REC一脉相承和性别从一个野生型C57BL/6J鼠标的捐助中插入动脉段eptor IFN-γ（IFN-γRKO的），其次是管理的鼠标干扰素-γ（交付通过腺病毒载体感染的小鼠肝脏，在这里，我们将详细介绍协议的优势我们的鼠标GA模型。
Protocol
Representative Results
Discussion
专注于鼠标GA模型所描述的协议。该程序可以被应用到其他接枝移植模型。这些模型包括人性化的异种移植（ 即人类冠状动脉节段插入到免疫缺陷小鼠的肾主动脉红外线），急性排斥反应的鼠标GA模型（ 即鼠标从一个到另一个遗传应变收件人遗传应变主动脉）。我们描述的小鼠模型更接近人类的遗传病变。第一种模式涉及从雄性小鼠的血管段插入到相同的近交系（C57BL/6J）一名女收?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由美国国立卫生研究院资助R01 HL109420 WM和AHA 9320033N LY支持。
Materials
| Name of the Reagent | Company | Catalogue Number | Comments (optional) |
| C57BL/6J (H-2b) | Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME) | 000664 | Donor (5 weeks) Recipient (8-12weeks) |
| Ketamine Hydrochloride Injection | Hospira Inc. | NDC 0409-2053 | Storage Solution(50 mg/ml) Working Solution(5 mg/ml) |
| Xylazine Sterile Solution | Lloyd Inc. | NADA# 139-236 | Storage Solution(100 mg/ml) Working Solution(1 mg/ml) |
| Ketoprofen | Fort Dodge Animal Health | NDC 0856-4396-01 | Storage Solution(100 mg/ml) Working Solution-oral (0.027 mg/ml) |
| Heparin Sodium | Sagent Pharmaceticals | NDC 25021-400 | Storage Solution(1000 U/ml) Working Solution(100 U/ml) |
| Saline solution (Sterile 0.9% Sodium Chloride) | CareFusion | AL4109 | |
| 0.9% Sodium Chloride Injection | Hospira Inc. | NDC 0409-4888-10 | To prepare the anesthetic |
| Petrolatum Ophthalmic Ointment | Dechra Veterinary Products | NDC 17033-211-38 | |
| Iodine Prep Pads | Triad Disposables, Inc. | NDC 50730-3201-1 | |
| Alcohol Prep Pads | McKesson Corp. | NDC 68599-5805-1 | |
| Microscope | Leica | MZ95 | |
| Micro Scissors | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5693 | |
| Spring Scissors | F.S.T | 15009-08 | To transect the aorta of donor or recipient |
| Extra Narrow Scissors | F.S.T | 14088-10 | |
| Needle Holder/Forceps | MICRINS | MI1542 | To hold the needle |
| Fine Forceps | F.S.T | 11254-20 | |
| Forceps | F.S.T | 11251-35 | |
| Standard Pattern Forceps | F.S.T | 11000-12 | |
| Forceps | F.S.T | 13011-12 | |
| LANCASTER Eye Speculum | Zepf Medical Instruments | 42-1209-07 | |
| Micro Vascular Clip | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-6472 | |
| Micro Clip Applying Forceps With Lock | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5440 | |
| Black Polyamide Monofilament Suture | AROSurgical Instruments Corporation | Cat #T4A10Q07 | 10-0 suture, Needle=70 microns |
| Black Monofilament Nylon Suture | Syneture (Covidien) |
SN-1956 | 6-0 suture |
| Non-Woven Songes | McKesson Corp. | Reorder No. 94442000 | |
| 1 ml Syringe | BD | REF 309659 | |
| 3 ml Syringe | BD | REF 309657 | |
| 10 ml Syringe | BD | REF 309604 | |
| 18G 1 1/2, Hypodermic Needle | BD | REF 305196 | |
| 25G 7/8, Hypodermic Needle | BD | REF 305124 | |
| 27G 1/2, Hypodermic Needle | BD | REF 305109 | |
| 30G 1/2, Hypodermic Needle | BD | REF 305106 | |
| Hearting Pad | Sunbeam | Z-1228-001 | |
| Trimmer | Wahl | 9854-500 | |
| Table 2. Specific reagents and equipment. |
Riferimenti
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