의 분리<em> Plasmodium falciparum</em자기 수단으로> 늦은 단계에 감염된 적혈구
Summary
hemozoin의 상자성의 특성은 월말 단계를 분리하는 데 사용됩니다<em> Plasmodium falciparum</em문화에 성장> – 감염된 적혈구. 방법은 간단하고 빠르고 기생충의 후속 침습적 기능에는 영향을 미치지 않습니다.
Abstract
다른 Plasmodium 종과는 달리, P. falciparum은 그 연구 1 용이 실험실에서 배양 할 수 있습니다. 달성 parasitemia는 ≈ 40 % 한도에 도달 할 수 있지만, 탐정은 일반적으로 약 10 %로 비율을 유지합니다. 대부분의 경우 그것은 문화를 풍부하게하고 주어진 실험을 진행하기 위해 감염되지 않은 사람에서 기생충 함유 적혈구를 (적혈구), 분리 할 필요가 있습니다.
때 P. falciparum은 적혈구를 감염 기생충이 저하과 헤모글로빈 2, 3의 피드. 그러나 기생충은 매우 독성 철 함유 haem 잔기 4, 5를 처리해야합니다. 기생충은 haemozoin 6, 7이라는 불활성 크리스탈 폴리머에 haem를 변화함으로써 독성을 도망 간다. 이 철 함유 분자은 그 식품 액포에 저장하고 그 안에 금속이 haem 8 하나에서 다른 산화 상태를 가지고있다. haem의 철의 철 상태ozoin는 감염되지 않은 적혈구의 부재 상자성체의 속성에 수여. 침략 기생충이 성숙에 도달로서, haemozoin의 내용은 P.의 최신 단계에서 더욱 paramagnetism을 준다고하는 9 증가 적혈구 내부 falciparum.
이 상자성체의 속성, P.의 최신 단계에 따라 falciparum 감염 – 적혈구는 자기 구슬이 포함 된 열을 통해 문화를 전달하여 분리 할 수 있습니다. 을 포함하는 열 자석 홀더에 배치 할 때이 구슬은 자석이된다. 흐름을 통해이 포함하면서 paramagnetism로 인해 감염된 적혈구는 다음 대부분의, 감염되지 않은 적혈구 및 기생충들을 포함하는 초기 단계를 들어, 열 안에 갇혀 될 것입니다.
여기, 우리는 좋은 기생충의 생존 능력 (10) 유지 자성 열과 후반 단계 기생충의 인구를 풍부하게 할 수있는 방법에 대해 설명합니다.이 절차를 수행 한 후 무소속의 문화가 남아있는 기생충은 성장을 계속 할 수 있도록 보육에 반환 할 수 있습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
말라리아 기생충 P.의 체외 문화에 falciparum 더 문화의 높은 확산 지점에 감염되지 않은 적혈구의 절반 이상으로 제한된 parasitemia을 나타냅니다. 대부분의 연구 실험을 위해, 감염된 적혈구으로 만 작동하는 것이 바람직하다. 이를 위해 분리 기술은 감염에 따라 문화를 분할 할 필요가 있습니다. 유용한 방법은 감염되지 않은 적혈구 11 두 그룹의 서로 다른 밀도를 이용 차동 centrifugati…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은이 자금을 지원 한 보조금 PRB-009 CS와 Secretaría Nacional 드 Ciencia Y Tecnología (SENACYT), 파나마에서 LC에 박사 장학금합니다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| RPMI 1640 Hepes Modified | Sigma-Aldrich | R4130 | Supplemented with 10% human serum, 2% glucose, and 0.2% sodium bicarbonate |
| MidiMACS Separator | MACS Miltenyi BioTec | 130-042-302 | |
| MACS MultiStand | MACS Miltenyi BioTec | 130-042-303 | |
| LS Columns | MACS Miltenyi BioTec | 130-042-401 | |
| Hemacytometer | Grafco | Grafco Neubauer Chamber | Can be found through many other suppliers |
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